拟茎点霉的原生质体制备方法及基因敲除方法

    公开(公告)号:CN109161480B

    公开(公告)日:2022-01-11

    申请号:CN201810903450.X

    申请日:2018-08-09

    摘要: 本申请公开一种拟茎点霉的原生质体制备方法及基因敲除方法,从枫香拟茎点霉菌丝体中制备原生质体,利用融合PCR和同源重组构建CRISPR‑Cas9载体,并将该技术应用于枫香拟茎点霉乳清酸脱氧核苷5'‑磷酸脱羧酶ura和丝裂原活化蛋白激酶MAPK1关键基因的敲除,本申请提供了该技术在枫香拟茎点霉基因功能研究中的应用,并为枫香拟茎点霉与植物共生,促其抗病、增产等机制研究提供了有效的技术方法和新的思路。

    一种快速构建丝状真菌表达载体的方法

    公开(公告)号:CN110305886A

    公开(公告)日:2019-10-08

    申请号:CN201910525376.7

    申请日:2019-06-18

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/65 C12N15/80

    摘要: 本发明公开了一种快速构建丝状真菌表达载体的方法,主要过程为:分别克隆酵母质粒复制模块、细菌质粒复制模块、丝状真菌复制模块及其相应的启动子序列,各片段间具有首尾相连接的同源臂约20-50 bp,采用电转化技术得到含有三模块的质粒,该质粒可用于非模式丝状真菌自身启动子强弱的快速鉴定、关键酶基因表达、次级代谢产物生物合成、内生菌与植物的相互作用研究等。本发明提供的方法快速、准确性高、无需使用限制性内切酶、可用于多片段和长片段载体的构建或替换,弥补了现有丝状真菌载体构建过程中限制性内切酶选择难及不适用于多片段或长片段的缺陷。

    一种高表达几丁质酶内生真菌枫香拟茎点霉的构建方法和应用

    公开(公告)号:CN112695054B

    公开(公告)日:2023-02-10

    申请号:CN202110080888.4

    申请日:2021-01-21

    摘要: 本发明公开了一种高表达几丁质酶内生真菌枫香拟茎点霉的构建方法和应用,该方法从内生真菌枫香拟茎点霉基因组中克隆到内源性几丁质酶基因,将其整合到内生真菌枫香拟茎点霉基因组的高表达位点或由质粒带入表达。体外平板对峙法该工程菌具有较好的几丁质酶活性和抑制镰刀菌的作用;体内研究表明该菌具有提高植物产生几丁质酶活性及抗镰刀菌的作用。该几丁质酶内生真菌枫香拟茎点霉工程菌可应用于小麦赤霉病的预防或防治。本发明的优势在于内生真菌枫香拟茎点霉在植物中的定殖不进入种子具有良好的生物安全性,避免了植物转基因等带来的争议问题,为开发新型的农业生防菌剂提供支撑。

    一种基于染料GelRed免标记核酸适配体传感器检测链霉素的方法和应用

    公开(公告)号:CN112697763A

    公开(公告)日:2021-04-23

    申请号:CN202110081604.3

    申请日:2021-01-21

    IPC分类号: G01N21/64

    摘要: 本发明公开了一种基于染料GelRed免标记核酸适配体传感器检测链霉素的方法和应用,利用染料GelRed在游离状态或与单链DNA共存时发出微弱荧光,而与双链DNA共存时与之特异性结合使得荧光信号显著增强的特性,构建了免标记核酸适配体传感器检测链霉素的方法。当有链霉素存在时,核酸适配体与链霉素结合,导致荧光信号显著降低,从而检测出链霉素。GelRed是一种集高灵敏、低毒性和超稳定与一身的核酸凝胶荧光染料,原料易得、成本低,易于规模化,与核酸适配体结合具有高亲和力和特异性,可用于链霉素快速检测,具有经济、快速、灵敏、准确等优点,对控制食品安全、保护人体健康具有重要的意义。

    一种基于拟茎点霉细胞发酵生产柚皮素的方法

    公开(公告)号:CN110283857A

    公开(公告)日:2019-09-27

    申请号:CN201910525288.7

    申请日:2019-06-18

    摘要: 本发明公开了一种基于拟茎点霉细胞发酵生产柚皮素的方法,利用CRISPR-Cas9敲除内生真菌拟茎点霉全局调控因子信号转导相关的MAPKK基因后,激活柚皮素的生物合成,可在突变株的发酵液及菌丝体中获得柚皮素。本发明首次发现了微生物天然合成途径产柚皮素,提供了一种快速生产柚皮素的方法,克服了植物提取法周期长,提取困难和化学合成法产物选择性差、纯度低、反应条件苛刻及环境污染严重缺点,具有选择性好、产物纯度高,反应条件温和、操作简便等优点,在食品和医药生产中具有良好的应用前景,为柚皮素生产提供了新的思路。

    一种用于检测头孢氨苄残留的比率荧光探针的制备方法及其制备的荧光探针和应用

    公开(公告)号:CN111647407B

    公开(公告)日:2022-11-08

    申请号:CN202010720104.5

    申请日:2020-07-23

    摘要: 本发明公开了一种用于检测头孢氨苄残留的比率荧光探针的制备方法及其制备的荧光探针和应用,该制备方法包括:碳量子点制备,碲化镉量子点制备,硅包覆碳点制备,荧光探针的合成。本发明制备工艺简单、原料易得、成本低,易于规模化生产。本发明制备的用于检测头孢氨苄残留的比率荧光探针灵敏度高,同时具有高选择性和特异性,仅对头孢氨苄有荧光响应,对其他抗生素均无反应。采用本发明制备的用于检测头孢氨苄残留的比率荧光探针可有效定量检测头孢氨苄残留,并且更加高效、节约成本、更加精确,对控制食品安全、保护人体健康具有重要的意义。

    一种苯氧基乙酸酯衍生物的酸催化合成方法及应用

    公开(公告)号:CN110423198B

    公开(公告)日:2022-03-25

    申请号:CN201910687145.6

    申请日:2019-07-29

    摘要: 本发明公开了一种苯氧基乙酸酯衍生物的酸催化合成方法及应用。该方法通过酸催化剂使得重氮酯类化合物与酚类化合物发生O‑H插入反应,构筑C‑O键,生成苯氧基乙酸酯衍生物。该方法采用酸为催化剂,条件温和(室温)、绿色高效并且可实现克级规模反应,具备工业化应用前景;无需过渡金属催化,避免了后处理中金属离子对环境造成的污染,符合绿色化学的宗旨。此外,本发明还将发展的方法学运用于某些具有显著药理活性的天然酚类产物或酚类药物,并得到相应的O‑H插入产物。如:天然产物厚朴酚及和厚朴酚,发现其O‑H插入产物的抗肿瘤及抗炎活性普遍高于厚朴酚及和厚朴酚本身。其抗肿瘤活性尤为明显,具有成药的可能性,为新药来源提供更多的选择。

    一种高表达几丁质酶内生真菌枫香拟茎点霉的构建方法和应用

    公开(公告)号:CN112695054A

    公开(公告)日:2021-04-23

    申请号:CN202110080888.4

    申请日:2021-01-21

    摘要: 本发明公开了一种高表达几丁质酶内生真菌枫香拟茎点霉的构建方法和应用,该方法从内生真菌枫香拟茎点霉基因组中克隆到内源性几丁质酶基因,将其整合到内生真菌枫香拟茎点霉基因组的高表达位点或由质粒带入表达。体外平板对峙法该工程菌具有较好的几丁质酶活性和抑制镰刀菌的作用;体内研究表明该菌具有提高植物产生几丁质酶活性及抗镰刀菌的作用。该几丁质酶内生真菌枫香拟茎点霉工程菌可应用于小麦赤霉病的预防或防治。本发明的优势在于内生真菌枫香拟茎点霉在植物中的定殖不进入种子具有良好的生物安全性,避免了植物转基因等带来的争议问题,为开发新型的农业生防菌剂提供支撑。