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公开(公告)号：CN116621949A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310459317.0
申请日：2023-04-25
IPC: C07K14/145 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/47 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/205 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种增加狂犬病毒G蛋白分泌表达的方法及其应用。该方法包括：1)以狂犬病毒的标准毒株的糖蛋白氨基酸序列为模板，在C端加入8个组氨酸序列，将表达糖蛋白全长密码子优化标记为G0蛋白；2)将G0蛋白460‑480跨膜区氨基酸进行突变，突变为柔性肽序列：GSGSGSGSGSGSGSGSGSGS，得到密码优化后的突变体G1蛋白；3)基因序列加入限制性内切酶位点和起始密码子序列后，合成序列；4)构建表达载体，转染宿主细胞后，进行单克隆株的筛选，得到狂犬病毒G蛋白分泌表达增高的单克隆株。本发明在狂犬病毒G蛋白构象的基础上，设计表达一种保留其原有抗原性且具有稳定构象的G蛋白，且在真核表达系统中容易表达；通过小鼠免疫保护实验，验证其具有良好的抗原性。
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公开(公告)号：CN107988239A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711222741.4
申请日：2017-11-29
Applicant: 南方医科大学
IPC: C12N15/40 , C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及一种寨卡病毒的重组基因，该重组基因的DNA序列如SEQ ID NO 1所示。将所述的重组基因插入到商用载体pMD19-T中得到表达载体，再将病毒穿梭载体VSV-G克隆所述的表达载体中得到克隆载体，然后所得到的克隆载体与含绿色荧光蛋白报告基因的慢病毒包装核心载体pLV-eGFP和慢病毒辅助质粒psPAX2共转染人胚胎肾细胞HEK-293T即得到重组假病毒。由于所述的重组假病毒不仅可以替代天然寨卡病毒进行血清中和抗体滴度的评价，而且可用于制备脑或肾脏的靶向载体。
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公开(公告)号：CN104450786A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410784351.6
申请日：2014-12-16
Applicant: 南方医科大学
IPC: C12N15/861 , C12N15/66 , A61P35/00
Abstract: 本发明涉及一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法，该方法由以下步骤组成：(1)取如SEQ ID NO.1所示的N端带有6个his标签的人端粒酶C端第936-1132片段的编码序列，经双酶切、连接反应克隆至含有绿色荧光蛋白基因GFP的穿梭质粒中，得到重组穿梭质粒；(2)将得到的重组穿梭质粒进行PmeⅠ酶切线性化，通过与骨架质粒PAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组，得到重组腺病毒质粒；(3)将得到的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞进行重组包装，收集具有绿色荧光的细胞，得到细胞包装的重组腺病毒；(4)将得到细胞包装的重组腺病毒采用氯化铯梯度离心法进行纯化，得到重组腺病毒载体。本方法所得到的重组腺病毒载体不仅可抑制肿瘤细胞增殖，而且起效快。
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公开(公告)号：CN114409745B
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202210337523.X
申请日：2022-04-01
Applicant: 南方医科大学 , 广州伯尼兹生物科技有限公司
IPC: C07K14/165 , C12N5/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效分泌表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的生产方法。本发明通过聚纤维纸片载体利用细胞生物反应器扩增表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，用含10%胎牛血清的培养基培养后，换成含7mM咖啡因、2mM KH2PO4及25‑50mg/L硫酸葡聚糖、5mM的丁酸钠、0.5mM羟乙基淀粉、1mM L‑精氨酸的无血清培养基生产表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，每隔5‑7天收集部分培养基并重新加入上述的无血清培养基，并根据每天细胞的糖耗补充葡萄糖，使葡萄糖的浓度保持在4g/L。采用本发明提供的方法有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114409745A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210337523.X
申请日：2022-04-01
Applicant: 南方医科大学 , 广州伯尼兹生物科技有限公司
IPC: C07K14/165 , C12N5/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效分泌表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的生产方法。本发明通过聚纤维纸片载体利用细胞生物反应器扩增表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，用含10%胎牛血清的培养基培养后，换成含7mM咖啡因、2mM KH2PO4及25‑50mg/L硫酸葡聚糖、5mM的丁酸钠、0.5mM羟乙基淀粉、1mM L‑精氨酸的无血清培养基生产表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，每隔5‑7天收集部分培养基并重新加入上述的无血清培养基，并根据每天细胞的糖耗补充葡萄糖，使葡萄糖的浓度保持在4g/L。采用本发明提供的方法有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108611325A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810377292.9
申请日：2018-04-25
Applicant: 南方医科大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一种抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白杂交瘤细胞株的制备方法，该由方法由以下步骤组成：(1)哺乳细胞表达的重组猪流行性腹泻病毒S1蛋白与206佐剂1：1充分混合后注射BALB/c小鼠，5μg/只。分别在首免后14d和35d进行两次加强免疫，采用206佐剂，剂量仍为5μg/只；(2)ELISA方法测定血清抗体滴度高于1：105的小鼠采集脾B淋巴细胞与杂交瘤细胞进行融合，挑选阳性克隆后进行亚克隆得到所述的抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白杂交瘤细胞株。本方法所制备的杂交瘤细胞株可表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体可用于检测猪流行性腹泻病毒。
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公开(公告)号：CN106520699A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610887189.X
申请日：2016-10-11
Applicant: 南方医科大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C07K19/00
CPC classification number: C07K14/005 , C07K2319/30 , C12N5/0686 , C12N2770/24122 , C12N2770/24134
Abstract: 本发明涉及一种重组HEK-293T细胞，其特征在于，该重组HEK-293T细胞是以HEK-293T细胞为宿主转染外源融合基因获得，其中所述的外源融合基因的核酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明所述重组HEK-293T细胞可分泌抗寨卡病毒的融合蛋白。
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公开(公告)号：CN114231497A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202210169904.1
申请日：2022-02-24
Applicant: 广州伯尼兹生物科技有限公司 , 南方医科大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/58 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于细胞工程与免疫学领域，具体涉及一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体。本发明筛选获得一株能高效稳定分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系以及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体；利用普通细胞培养皿培养本发明的重组杂交瘤细胞系，产量可达10mg/L，且纯度能达90%以上；本发明的单抗具有高中和活性，单抗浓度为0.00103μg/mL时即可抑制50％以上新冠假病毒活性，是目前所报告的新冠单抗中和活性最佳的。本发明提供的杂交瘤细胞系或单克隆抗体在新冠病毒的血清学检测、制备新冠病毒感染的试剂或药物及制备新冠病毒抗原或抗体检测的试剂中具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN114231497B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202210169904.1
申请日：2022-02-24
Applicant: 广州伯尼兹生物科技有限公司 , 南方医科大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/58 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于细胞工程与免疫学领域，具体涉及一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体。本发明筛选获得一株能高效稳定分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系以及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体；利用普通细胞培养皿培养本发明的重组杂交瘤细胞系，产量可达10mg/L，且纯度能达90%以上；本发明的单抗具有高中和活性，单抗浓度为0.00103μg/mL时即可抑制50％以上新冠假病毒活性，是目前所报告的新冠单抗中和活性最佳的。本发明提供的杂交瘤细胞系或单克隆抗体在新冠病毒的血清学检测、制备新冠病毒感染的试剂或药物及制备新冠病毒抗原或抗体检测的试剂中具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN113336833A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110626921.9
申请日：2021-06-04
Applicant: 广州伯尼兹生物科技有限公司 , 南方医科大学
IPC: C07K14/165 , C12N5/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效分泌表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白的生产方法。本发明通过聚纤维纸片载体利用细胞生物反应器扩增表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白，在细胞培养阶段用含10％胎牛血清的DMEM培养基，待培养2‑3天后，弃去全部培养基并用PBS冲洗1‑2遍去除血清，后全部换成无血清培养基开始生产表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白；每隔3‑5天收集部分培养基并重新加入无血清培养基，并根据每天细胞的糖耗补充葡萄糖，使葡萄糖的浓度保持在4g/L。采用本发明提供的方法有效提高细胞的表达水平，降低了疫苗的制造成本，为实现疫苗的规模化生产奠定了基础。
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