一种模块化祖先重建的宽谱PAM Cas9变体及制备方法

    公开(公告)号:CN119931989A

    公开(公告)日:2025-05-06

    申请号:CN202510360283.9

    申请日:2025-03-25

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明提供一种模块化祖先重建的宽谱PAM Cas9变体及制备方法;通过一种模块化祖先重建,获得宽谱PAM的Cas9变体:RHCas9,避免全局性改造引发的催化活性损失或非靶向功能混杂;在维持核酸酶高活性的前提下拓宽了底物识别范围。RHCas9与野生型酶相比,RHCas9对底物识别种类提高6倍,且不影响原本偏好位点的编辑效率,在新增编辑位点上与原偏好位点具有相当或更高的效率。既可规避全局性ASR引发的功能混杂,又能精准释放目标结构域的进化潜能,从而在维持高编辑效率与低脱靶率的前提下,突破PAM限制。此外,模块化ASR无需预知高分辨率结构信息,普适于各类Cas蛋白的定向优化,为开发高效、安全且适配递送载体的基因编辑工具提供了全新范式。

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