公开(公告)号：CN119931989A

公开(公告)日：2025-05-06

申请号：CN202510360283.9

申请日：2025-03-25

Applicant: 吉林大学

Inventor： 李占军 ,  牛文超 ,  钱育强 ,  王迪 ,  龚恒 ,  郝杨 ,  于红亮

IPC: C12N9/22 ,  G16B30/10 ,  G16B10/00

Abstract: 本发明提供一种模块化祖先重建的宽谱PAM Cas9变体及制备方法；通过一种模块化祖先重建，获得宽谱PAM的Cas9变体：RHCas9，避免全局性改造引发的催化活性损失或非靶向功能混杂；在维持核酸酶高活性的前提下拓宽了底物识别范围。RHCas9与野生型酶相比，RHCas9对底物识别种类提高6倍，且不影响原本偏好位点的编辑效率，在新增编辑位点上与原偏好位点具有相当或更高的效率。既可规避全局性ASR引发的功能混杂，又能精准释放目标结构域的进化潜能，从而在维持高编辑效率与低脱靶率的前提下，突破PAM限制。此外，模块化ASR无需预知高分辨率结构信息，普适于各类Cas蛋白的定向优化，为开发高效、安全且适配递送载体的基因编辑工具提供了全新范式。