公开(公告)号：CN118460682A

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202410936935.4

申请日：2024-07-12

申请人： 畜科生物工程有限公司 ,  四川农业大学 ,  生猪技术创新中心(重庆)

发明人： 吴放 ,  朱玲 ,  李叶 ,  葛良鹏 ,  曾秀 ,  刘作华 ,  孙静 ,  徐志文 ,  游冬 ,  周远成

IPC分类号： C12Q1/6844 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/70 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19 ,  C12R1/93

摘要： 本发明提供了一种基于RAA和CRISPR‑Cas13d的PEDV检测方法、试剂盒及其应用，属于分子生物学诊断技术领域；本发明使用RAA引物和标准阳性质粒PMD‑19T‑PEDV M作为模板进行RAA扩增，扩增产物经过纯化后用于T7体外转录，将DNA模板转录成靶标ssRNA；将转录的ssRNA与Cas13d蛋白、crRNA和荧光RNA报告探针进行反应进行荧光信号检测。本发明将以RT‑RAA技术和CRISPR‑Cas13d技术结合，实现对PEDV临床样本的高灵敏度、低复杂性的可视化检测，具有操作简单、检测灵敏、结果可视化的优点，从而为提高生猪养殖行业检测PEDV，降低生物安全风险提供技术手段。通过体外合成用于扩增的标准阳性质粒pMD‑19T‑PEDV和RAA的引物，原核表达CRISPR/Cas13d蛋白、体外转录CrRNA，其应用于猪流行性腹泻病毒的检测。

公开(公告)号：CN118272583A

公开(公告)日：2024-07-02

申请号：CN202410581336.5

申请日：2024-05-11

申请人： 四川农业大学 ,  畜科生物工程有限公司 ,  生猪技术创新中心(重庆)

发明人： 徐志文 ,  游冬 ,  葛良鹏 ,  周远成 ,  朱玲 ,  丁玉春 ,  吴梦 ,  刘作华 ,  曾秀

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

摘要： 本发明公开了一种检测或辅助检测猪伪狂犬病毒的方法。该方法包括如下步骤：以待测样本的总DNA为模板，以SEQ ID NO:7所示的上游引物和SEQ ID NO:10所示的下游引物组成的RAA引物对进行RAA扩增，得到RAA扩增产物；对RAA扩增产物进行T7体外转录，得到转录产物；采用EQ ID NO:2所示的crRNA‑2、ssRNA荧光报告分子UUUUUU和EsCas13a蛋白对转录产物进行CRISPR切割，得到切割反应产物；通过检测切割反应产物的荧光判定待测样本是否含有猪伪狂犬病毒。本发明所提供的RAA引物对和crRNA‑2可以检测猪伪狂犬病毒。本发明具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN116942720A

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202311219836.6

申请日：2023-09-21

申请人： 畜科生物工程有限公司 ,  四川农业大学 ,  眉山市食品药品检验检测中心(眉山市药品不良反应监测中心)

发明人： 漆信桥 ,  张明芝 ,  周梦佳 ,  李刚 ,  李英伦 ,  徐志文 ,  朱玲 ,  唐华侨 ,  周远成

IPC分类号： A61K36/284 ,  A61P31/04

摘要： 本发明公开了一种苍术提取物应用于抑制细菌生物膜及抑制细菌生物膜形成的组合物，属于生物膜领域，所述苍术提取物为苍术乙醇提取物，抑制细菌生物膜形成的组合物含有苍术提取物，所述苍术提取物为苍术乙醇提取物，所述苍术乙醇提取物为苍术乙醇提取物氯仿部位。本发明苍术提取物在不抑制菌生长的情况下，可以抑制生物被膜的形成。

公开(公告)号：CN114015805A

公开(公告)日：2022-02-08

申请号：CN202111191385.0

申请日：2021-10-13

申请人： 四川农业大学 ,  畜科生物工程有限公司

发明人： 徐志文 ,  周远成 ,  朱玲 ,  聂民财 ,  邝山

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了检测盖塔病毒的荧光RT‑RAA引物、试剂盒及其应用。本发明所保护的基于荧光RT‑RAA的检测盖塔病毒的试剂盒包括检测盖塔病毒的组合物即序列表中序列2所示的引物RT‑RAA‑F2、序列表中序列3所示的引物RT‑RAA‑R2和序列表中序列4所示探针。实验证明，该试剂盒能够快速高效的检测GETV，在39℃恒温反应30min即可完成检测，灵敏度为8拷贝/反应的GETV SC201807病毒质粒转录本和20TCID50/反应的GETV SC201807病毒RNA，特异性好，准确性高，可以为猪盖塔病毒的临床样品的检测提供技术支撑。

公开(公告)号：CN116953230A

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202210415027.1

申请日：2022-04-20

申请人： 四川农业大学 ,  畜科生物工程有限公司

发明人： 徐志文 ,  周远成 ,  朱玲 ,  王玉玲 ,  黄瑶 ,  谷思睿

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/535

摘要： 本发明公开了检测猪盖塔病毒的间接ELISA试剂盒。所述试剂盒包括包被抗原，所述包被抗原可为猪盖塔病毒E2蛋白。所述E2蛋白的氨基酸序列可为序列表中序列4。实验证明，本发明所建立的间接ELISA试剂盒特异性较高，与CSFV、PRRSV等无交叉反应，重复性良好，灵敏度高，使用稀释倍数为1：640的猪盖塔病毒阳性血清仍能准确检测出阳性，与金标准检测方法相比总符合率为96.7％。该方法便于规模化应用，可作为目前GETV血清学检测及疫苗评价的可靠选择。

公开(公告)号：CN114045362B

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202111462069.2

申请日：2021-12-02

申请人： 四川农业大学 ,  畜科生物工程有限公司

发明人： 徐志文 ,  周远成 ,  朱玲 ,  聂民财 ,  鲁令华 ,  邝山

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了基于RT‑RAA荧光方法检测乙型脑炎病毒的试剂和试剂盒。所述试剂盒包括检测乙型脑炎病毒的组合物；所述组合物包括引物JEV‑RAA‑F2、JEV‑RAA‑R1和探针；所述引物JEV‑RAA‑F2的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述JEV‑RAA‑R1的核苷酸序列如序列3所示；所述探针的核苷酸序列如序列4所示。该试剂盒只需39℃条件下反应30min就可以准确检测出待测样本中是否含有乙型脑炎病毒，且具有很高的灵敏性和特异性，最低检测极限为5.5×101copies/μL的JEV阳性标准质粒转录本，可以应用于临床中乙型脑炎病毒的快速高效检测，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN114045362A

公开(公告)日：2022-02-15

申请号：CN202111462069.2

申请日：2021-12-02

申请人： 四川农业大学 ,  畜科生物工程有限公司

发明人： 徐志文 ,  周远成 ,  朱玲 ,  聂民财 ,  鲁令华 ,  邝山

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了基于RT‑RAA荧光方法检测乙型脑炎病毒的试剂和试剂盒。所述试剂盒包括检测乙型脑炎病毒的组合物；所述组合物包括引物JEV‑RAA‑F2、JEV‑RAA‑R1和探针；所述引物JEV‑RAA‑F2的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述JEV‑RAA‑R1的核苷酸序列如序列3所示；所述探针的核苷酸序列如序列4所示。该试剂盒只需39℃条件下反应30min就可以准确检测出待测样本中是否含有乙型脑炎病毒，且具有很高的灵敏性和特异性，最低检测极限为5.5×101copies/μL的JEV阳性标准质粒转录本，可以应用于临床中乙型脑炎病毒的快速高效检测，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN117304337A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311171710.6

申请日：2023-09-12

申请人： 四川农业大学 ,  畜科生物工程有限公司 ,  生猪技术创新中心(重庆)

发明人： 徐志文 ,  王玉顺 ,  李叶 ,  朱玲 ,  葛良鹏 ,  周远成

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  A61K39/125 ,  A61P31/14 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68

摘要： 本发明公开了一种A型塞内卡病毒VP1抗原及其应用。本发明属于生物技术领域，具体涉及一种A型塞内卡病毒VP1抗原及其应用。本发明提供的融合蛋白，为将荧光蛋白融合于塞内卡病毒VP1抗原的N端得到的蛋白质，融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.6。通过海肾荧光素酶标记塞内卡病毒VP1抗原，来捕获特异性抗体的新型荧光素酶免疫吸附试验方法，检测动态范围更广，无需连续稀释样本就可实现半定量检测，提高试验结果的准确性，为SVA血清学流行趋势提供技术支持。

公开(公告)号：CN116942720B

公开(公告)日：2023-12-15

申请号：CN202311219836.6

申请日：2023-09-21

申请人： 畜科生物工程有限公司 ,  四川农业大学 ,  眉山市食品药品检验检测中心(眉山市药品不良反应监测中心)

发明人： 漆信桥 ,  张明芝 ,  周梦佳 ,  李刚 ,  李英伦 ,  徐志文 ,  朱玲 ,  唐华侨 ,  周远成

IPC分类号： A61K36/284 ,  A61P31/04

摘要： 本发明公开了一种苍术提取物应用于抑制细菌生物膜及抑制细菌生物膜形成的组合物，属于生物膜领域，所述苍术提取物为苍术乙醇提取物，抑制细菌生物膜形成的组合物含有苍术提取物，所述苍术提取物为苍术乙醇提取物，所述苍术乙醇提取物为苍术乙醇提取物氯仿部位。本发明苍术提取物在不抑制菌生长的情况下，可以抑制生物被膜的形成。

公开(公告)号：CN115976108B

公开(公告)日：2024-08-23

申请号：CN202310034864.4

申请日：2023-01-10

申请人： 四川农业大学

发明人： 朱玲 ,  杨雁婷 ,  徐志文

IPC分类号： C12N15/869 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/34 ,  C12N15/24 ,  A61K39/12 ,  A61K39/295 ,  A61K38/20 ,  A61P31/20

摘要： 本发明公开了一种表达PCV2、PCV3Cap蛋白的重组伪狂犬病毒载体、构建方法与应用，属于疫苗技术领域。该构建方法包括以下步骤：(1)将SEQ ID NO.1序列插入到pEGFP‑gI28k真核表达质粒中，获得pEGFP‑gI28k‑2Cap‑3Cap‑IL4质粒；(2)pEGFP‑gI28k‑2Cap‑3Cap‑IL4质粒和psgRNA‑gE质粒转染BHK‑21细胞，再接种PRV‑XJ‑ΔTK病毒液；(3)待细胞出现80％的病变并观察到发出绿色荧光的病毒蚀斑时，反复冻融，离心取上清，上清液中含有PRV真核表达载体rPRVXJ‑ΔgE/gI/TK‑2Cap‑3Cap‑IL4；(4)纯化载体。