生产次丹参酮二烯的酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN103820344A

    公开(公告)日:2014-05-28

    申请号:CN201110453388.7

    申请日:2011-12-30

    摘要: 本发明公开了生产次丹参酮二烯的酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用。本发明所提供的基因工程菌是按照包括以下步骤的方法构建的:在出发酿酒酵母中引入外源的丹参柯巴基焦磷酸合酶基因(SmCPS)和丹参次丹参酮二烯合酶基因(SmKSL)得到生产次丹参酮二烯的重组酿酒酵母,记作重组酿酒酵母ZD-T-000和ZD-T-010。在此基础上,提高3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶、萜类调控因子蛋白UPC2、牻牛儿牻牛儿基焦磷酸合酶、法呢基焦磷酸合酶中的一种或几种蛋白的活性,构建得到24株(ZD-T-001~ZD-T-008,ZD-T-011~ZD-T-018,ZD-T-021~ZD-T-028)高产次丹参酮二烯的重组酿酒酵母菌株。本发明所构建的酿酒酵母ZD-Tans-001在好养氧条件下,发酵6天时可生产487.91mg/L的次丹参酮二烯。

    生产达玛二烯和原人参二醇的重组微生物及其构建方法

    公开(公告)号:CN102925376B

    公开(公告)日:2014-05-07

    申请号:CN201210453416.X

    申请日:2012-11-13

    IPC分类号: C12N1/19 C12P33/00 C12R1/865

    摘要: 本发明公开了一种生产达玛二烯和原人参二醇的重组微生物及其构建方法。本发明提供的一种构建重组菌的方法,包括如下步骤:向酿酒酵母中导入达玛二烯合酶、原人参二醇合成酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶编码基因,得到重组菌1。本发明通过同源重组的手段,将达玛二烯合酶、原人参二醇合成酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶编码基因均导入酿酒酵母中得到初始重组菌,发现其可产生微量的达玛二烯和原人参二醇;再提高初始重组菌的tHMG1的活性,得到中间重组菌,其达玛二烯和原人参二醇产量明显提高;在中间重组菌的基础上又提高其ERG1、ERG9和ERG20一个或者两个或者三个的活性,发现也能构建出达玛二烯和原人参二醇产量提高的重组菌;为人工合成达玛二烯和原人参二醇奠定了基础。

    生产达玛二烯和原人参二醇的重组微生物及其构建方法

    公开(公告)号:CN102925376A

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201210453416.X

    申请日:2012-11-13

    IPC分类号: C12N1/19 C12P33/00 C12R1/865

    摘要: 本发明公开了一种生产达玛二烯和原人参二醇的重组微生物及其构建方法。本发明提供的一种构建重组菌的方法,包括如下步骤:向酿酒酵母中导入达玛二烯合酶、原人参二醇合成酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶编码基因,得到重组菌1。本发明通过同源重组的手段,将达玛二烯合酶、原人参二醇合成酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶编码基因均导入酿酒酵母中得到初始重组菌,发现其可产生微量的达玛二烯和原人参二醇;再提高初始重组菌的tHMG1的活性,得到中间重组菌,其达玛二烯和原人参二醇产量明显提高;在中间重组菌的基础上又提高其ERG1、ERG9和ERG20一个或者两个或者三个的活性,发现也能构建出达玛二烯和原人参二醇产量提高的重组菌;为人工合成达玛二烯和原人参二醇奠定了基础。

    生产次丹参酮二烯的酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN103820344B

    公开(公告)日:2016-12-14

    申请号:CN201110453388.7

    申请日:2011-12-30

    摘要: 本发明公开了生产次丹参酮二烯的酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用。本发明所提供的基因工程菌是按照包括以下步骤的方法构建的:在出发酿酒酵母中引入外源的丹参柯巴基焦磷酸合酶基因(SmCPS)和丹参次丹参酮二烯合酶基因(SmKSL)得到生产次丹参酮二烯的重组酿酒酵母,记作重组酿酒酵母ZD-T-000和ZD-T-010。在此基础上,提高3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶、萜类调控因子蛋白UPC2、牻牛儿牻牛儿基焦磷酸合酶、法呢基焦磷酸合酶中的一种或几种蛋白的活性,构建得到24株(ZD-T-001~ZD-T-008,ZD-T-011~ZD-T-018,ZD-T-021~ZD-T-028)高产次丹参酮二烯的重组酿酒酵母菌株。本发明所构建的酿酒酵母ZD-Tans-001在好养氧条件下,发酵6天时可生产487.91mg/L的次丹参酮二烯。