公开(公告)号：CN108707573B

公开(公告)日：2021-01-22

申请号：CN201810503190.7

申请日：2018-05-23

申请人： 天津科技大学

发明人： 马倩 ,  谢希贤 ,  陈宁 ,  张权威 ,  鄢芳清 ,  侯正杰 ,  莫晓琳 ,  徐庆阳 ,  李燕军 ,  张成林 ,  范晓光

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种产生N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用,所述基因工程菌利用阿拉伯糖或鼠李糖同时诱导N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径的强化，以及旁路代谢途径的弱化，实现精准调控。本发明所构建的大肠杆菌基因工程菌W3110‑GLA‑1(阿拉伯糖诱导型)、W3110‑GLA‑2(鼠李糖诱导型)以葡萄糖为底物可高效合成N‑乙酰氨基葡萄糖，在5L发酵罐发酵72h后N‑乙酰氨基葡萄糖的产量达到168g/L、160g/L，转化率约48％、47％，具有较强的工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN108776186A

公开(公告)日：2018-11-09

申请号：CN201810851997.X

申请日：2018-07-30

申请人： 天津科技大学

发明人： 马倩 ,  莫晓琳 ,  陈宁 ,  谢希贤 ,  侯正杰 ,  张权威 ,  徐庆阳 ,  李燕军 ,  张成林 ,  范晓光

IPC分类号： G01N30/02

摘要： 本发明提供了一种谷氨酸棒杆菌代谢组的分析方法，包括：谷氨酸棒杆菌细胞收集及淬灭；胞内代谢物提取；代谢物衍生化；最后通过GC-MS及多元统计对样品分析得到代谢组结果；所述谷氨酸棒杆菌代谢组的分析手段涉及代谢反应的终止、代谢物的提取、代谢物的鉴定与定量、统计学分析，从而获得谷氨酸棒杆菌发酵过程中不同阶段代谢物的定性和定量结果，为谷氨酸棒杆菌代谢组的分析提供了方法，这种方法对促进谷氨酸棒杆菌的代谢组学及代谢工程研究具有重要的意义。

公开(公告)号：CN113817658B

公开(公告)日：2023-06-16

申请号：CN202110973426.5

申请日：2021-08-24

申请人： 天津科技大学

发明人： 马倩 ,  张颖 ,  侯正杰 ,  谢希贤 ,  杨蒙雅 ,  卓明洋 ,  赵可欣 ,  陈宁 ,  徐庆阳 ,  张成林 ,  李燕军 ,  范晓光

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/31 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种利用木糖诱导生产N‑乙酰神经氨酸的基因工程菌。以大肠杆菌为出发菌株，在基因组上整合N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径，并引入来自项圈藻的N‑乙酰氨基葡萄糖2‑差向异构酶基因bAGE以及N‑乙酰神经氨酸合成酶基因neuB，构建N‑乙酰神经氨酸合成途径，并敲除其分解代谢途径的关键基因nanATEK。同时对合成N‑乙酰神经氨酸所需的前体物质的代谢途径进行多拷贝强化并对部分旁路代谢途径进行敲除，通过对产GlcNAc和Neu5Ac的关键酶基因进行不同拷贝数的优化，最终确定了关键酶基因的最佳比例，得到一株N‑乙酰神经氨酸高产菌。N‑乙酰神经氨酸产量最高可达28g/L，生产强度最高可达0.67g/(L×h)，为目前报道的最高值，具有重要的工业应用价值。

公开(公告)号：CN113817658A

公开(公告)日：2021-12-21

申请号：CN202110973426.5

申请日：2021-08-24

申请人： 天津科技大学

发明人： 马倩 ,  张颖 ,  侯正杰 ,  谢希贤 ,  杨蒙雅 ,  卓明洋 ,  赵可欣 ,  陈宁 ,  徐庆阳 ,  张成林 ,  李燕军 ,  范晓光

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/31 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种利用木糖诱导生产N‑乙酰神经氨酸的基因工程菌。以大肠杆菌为出发菌株，在基因组上整合N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径，并引入来自项圈藻的N‑乙酰氨基葡萄糖2‑差向异构酶基因bAGE以及N‑乙酰神经氨酸合成酶基因neuB，构建N‑乙酰神经氨酸合成途径，并敲除其分解代谢途径的关键基因nanATEK。同时对合成N‑乙酰神经氨酸所需的前体物质的代谢途径进行多拷贝强化并对部分旁路代谢途径进行敲除，通过对产GlcNAc和Neu5Ac的关键酶基因进行不同拷贝数的优化，最终确定了关键酶基因的最佳比例，得到一株N‑乙酰神经氨酸高产菌。N‑乙酰神经氨酸产量最高可达28g/L，生产强度最高可达0.67g/(L×h)，为目前报道的最高值，具有重要的工业应用价值。

公开(公告)号：CN109298185A

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201811138512.9

申请日：2018-09-28

申请人： 天津科技大学

发明人： 马倩 ,  侯正杰 ,  谢希贤 ,  陈宁 ,  张权威 ,  莫晓琳 ,  李燕军 ,  张成林 ,  范晓光 ,  徐庆阳

IPC分类号： G01N33/68 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62

摘要： 一种筛查谷氨酸棒杆菌中蛋白相互作用的方法。所述方法包括：(1)利用基因工程技术将谷氨酸棒杆菌中目的基因克隆到原核表达载体(2)构建蛋白表达菌株并进行目的蛋白的大量表达(3)谷氨酸棒杆菌胞内蛋白的提取(4)对目的蛋白进行纯化并进行His-Pull Down实验捕获相互作用蛋白(5)对His-Pull Down后的蛋白进行还原烷基化和胶内酶解，并通过液相色谱质谱联用仪鉴定获取的目的基因互作蛋白。本发明对理解谷氨酸棒杆菌代谢过程中蛋白的相互作用具有重要的意义，进一步基于关键蛋白之间的相互配合关系，相应地进行协调代谢工程改造以及其他方面的运用，因而具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN108707573A

公开(公告)日：2018-10-26

申请号：CN201810503190.7

申请日：2018-05-23

申请人： 天津科技大学

发明人： 马倩 ,  谢希贤 ,  陈宁 ,  张权威 ,  鄢芳清 ,  侯正杰 ,  莫晓琳 ,  徐庆阳 ,  李燕军 ,  张成林 ,  范晓光

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N9/1288 ,  C07K14/245 ,  C12N9/1096 ,  C12N9/1205 ,  C12P19/26 ,  C12Y207/01011

摘要： 本发明公开了一种产生N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用,所述基因工程菌利用阿拉伯糖或鼠李糖同时诱导N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径的强化，以及旁路代谢途径的弱化，实现精准调控。本发明所构建的大肠杆菌基因工程菌W3110‑GLA‑1(阿拉伯糖诱导型)、W3110‑GLA‑2(鼠李糖诱导型)以葡萄糖为底物可高效合成N‑乙酰氨基葡萄糖，在5L发酵罐发酵72h后N‑乙酰氨基葡萄糖的产量达到168g/L、160g/L，转化率约48％、47％，具有较强的工业化生产潜力。