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公开(公告)号：CN105331744B
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201510901623.0
申请日：2015-12-08
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6837 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种鸭黄病毒核酸液相芯片检测方法，包括下列步骤：（1）设计引物探针（2）RT‑PCR反应体系的建立（3）液相芯片检测体系的建立。本发明的检测方法具有高通量、检测灵敏度高、重复性好等优点，结合RT‑PCR技术，通过稳定性试验、特异性试验与灵敏度试验，成功构建了液相芯片技术检测鸭病毒的检测平台。
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公开(公告)号：CN105505926A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610024713.0
申请日：2016-01-14
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
CPC分类号： Y02A50/451 , Y02A50/54 , C12N7/00 , C12N15/70 , C12N2770/32423 , C12Q1/706 , C12Q2600/166
摘要： 本发明公开了含有甲肝病毒HAV5’-UTR基因的病毒样颗粒的制备方法。该病毒样颗粒是由MS2噬菌体编码外壳蛋白包裹HAV5’-UTR RNA的一种RNA-蛋白复合体；将编码组氨酸标签序列插入MS2噬菌体编码外壳蛋白的β发夹环结构序列中，构建含有重组组氨酸标签的MS2噬菌体外壳蛋白和表达成熟酶蛋白基因的pNH-MS2his重组质粒。通过RT-RCR扩增HAV5’-UTR基因，将其克隆于pNH-MS2his中，构建原核重组表达质粒并命名为pNH-MS2his-HAV5’-UTR。将所得pNH-MS2his-HAV5’-UTR质粒转化于表达大肠杆菌BL21中进行诱导表达。采用Ni-NTA的纯化柱纯化病毒样颗粒，所得的病毒样颗粒即为含HAV5’-UTR基因的病毒样颗粒，命名为HAV5’-UTR-VLPs。本发明的HAV5’-UTR-VLPs病毒样颗粒可作为RT-PCR检测的标准品和质控品，无传染性，安全可靠、稳定性好，具有耐核糖核酸酶的特点。
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公开(公告)号：CN105385788A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201510910818.1
申请日：2015-12-10
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
CPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2565/137
摘要： 本发明公开了一种西方马脑脊髓炎病毒PCR-DHPLC检测引物和方法，包括下列步骤：（1）样品中病毒RNA的提取及特异性片段的扩增；（2）PCR-DHPLC分析。本发明建立的WEEV的PCR-DHPLC方法在检测其他马病病毒时相互之间无交叉反应，未检测到其他马病病毒的阳性吸收峰；对WEEV不同模板浓度进行检测，检测极限可达到102拷贝/μL。所建立的方法结果与荧光RT-PCR的符合率达100%。
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公开(公告)号：CN103173574A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201310116883.8
申请日：2013-04-03
摘要： 本发明公开了一种基于液相芯片检测鲤春病毒血症病毒的方法。本发明提供了辅助鉴定鲤春病毒血症病毒的特异引物对，由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。本发明还保护辅助鉴定鲤春病毒血症病毒的引物探针组合物，由所述特异引物对和探针T1组成；所述探针T1的核苷酸序列如序列表的序列3所示。采用本发明提供的特异引物对鉴定鲤春病毒血症病毒具有良好的特异性。采用本发明提供的引物探针组合物结合液相芯片鉴定鲤春病毒血症病毒，具有特异性好、灵敏度高、操作简便、所需时间短、不污染环境、不存在对人的健康威胁，可以进行高通量检测的优点。本发明非常适合对进出境水生动物进行检测。
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公开(公告)号：CN105331744A
公开(公告)日：2016-02-17
申请号：CN201510901623.0
申请日：2015-12-08
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
CPC分类号： C12Q1/6834 , C12Q2531/113 , C12Q2563/107 , C12Q2563/149
摘要： 本发明公开了一种鸭黄病毒核酸液相芯片检测方法，包括下列步骤：（1）设计引物探针（2）RT-PCR反应体系的建立（3）液相芯片检测体系的建立。本发明的检测方法具有高通量、检测灵敏度高、重复性好等优点，结合RT-PCR技术，通过稳定性试验、特异性试验与灵敏度试验，成功构建了液相芯片技术检测鸭病毒的检测平台。
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公开(公告)号：CN105154590A
公开(公告)日：2015-12-16
申请号：CN201510650765.4
申请日：2015-10-10
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
CPC分类号： C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2545/113 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107
摘要： 本发明公开了一种水样中甲型肝炎病毒和诺如病毒检测质控试剂盒和检测方法，试剂盒包括：HAV 2×RT-PCR mix、NV GⅠ+GⅡ分型2×RT-PCR mix、MS2 2×RT-PCR mix、无RNase水、HAV阳性对照、NV GⅠ+GⅡ阳性对照、大肠杆菌噬菌体MS2（2.5×1010pfu/mL）各一管。检测方法包括以下步骤：①浓缩病毒；②病毒RNA提取；③大肠杆菌噬菌体MS2标准曲线的建立；④甲型肝炎病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型、大肠杆菌噬菌体MS2检测；⑤病毒RNA回收率确定；⑥结果判定。本发明的水样中甲型肝炎病毒和诺如病毒检测质控试剂盒和检测方法，从样品前处理、检测和结果判定等关键步骤对病毒检测的整个过程进行了有效的质量控制，保证了检测过程的稳定性、准确性和可控制性，填补了该领域的检测技术空白。
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公开(公告)号：CN105331747A
公开(公告)日：2016-02-17
申请号：CN201510915940.8
申请日：2015-12-10
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
CPC分类号： C12Q1/701 , C12Q1/6848 , C12Q2531/119 , C12Q2527/143
摘要： 本发明公开了一组检测鸭黄病毒的RT-LAMP引物，引物包括上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3、下游外引物B3、上游环引物LF、下游环引物LB。本发明的引物序列用在RT-LAMP上检测鸭黄病毒，确性好、灵敏度，建立的检测方法：1）快速：从样品处理到出结果仅需2小时左右；2）实现了一步法RT-LAMP检测鸭黄病毒的目的；3）灵敏：使用该方法比传统PCR方法灵敏度高10～100倍；4）特异：与常见禽类其他病毒不发生交叉反应；5）操作简单，具有良好重复性。
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公开(公告)号：CN104928401A
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201510310646.4
申请日：2015-06-09
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
CPC分类号： C12Q1/701 , C12Q1/6851 , C12Q2531/131 , C12Q2561/101 , C12Q2545/113
摘要： 本发明公开了一组检测东方马脑脊髓炎病毒的核苷酸序列和试剂盒，正向引物的序列如SEQ ID NO：1所示；反向引物的序列如SEQ ID NO：2所示；荧光探针的序列如SEQ ID NO：3所示；荧光探针序列的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团MGB。与常规RT-PCR相比，利用本发明的核苷酸序列和试剂盒建立的TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测东方马脑脊髓炎更加快速，特异性和敏感性更高，灵敏度为常规RT-PCR方法的1000倍。
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公开(公告)号：CN103173574B
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201310116883.8
申请日：2013-04-03
摘要： 本发明公开了一种基于液相芯片检测鲤春病毒血症病毒的方法。本发明提供了辅助鉴定鲤春病毒血症病毒的特异引物对，由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。本发明还保护辅助鉴定鲤春病毒血症病毒的引物探针组合物，由所述特异引物对和探针T1组成；所述探针T1的核苷酸序列如序列表的序列3所示。采用本发明提供的特异引物对鉴定鲤春病毒血症病毒具有良好的特异性。采用本发明提供的引物探针组合物结合液相芯片鉴定鲤春病毒血症病毒，具有特异性好、灵敏度高、操作简便、所需时间短、不污染环境、不存在对人的健康威胁，可以进行高通量检测的优点。本发明非常适合对进出境水生动物进行检测。
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公开(公告)号：CN104357462A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410649817.1
申请日：2014-11-14
申请人： 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
摘要： 本发明公开了一种鸭甲肝病毒VP1蛋白抗原域的重组蛋白的制备方法及其应用，制备方法包括下列步骤：（1）鸭甲肝病毒VP1蛋白抗原域的特异性引物设计与合成；（2）RT-PCR扩增和重组表达质粒的构建；（3）重组质粒的诱导表达及表达产物的鉴定；（4）表达产物的纯化和Westernblot活性检测。本发明制备的重组蛋白具备良好的抗原性，可以用于检测鸭甲肝病毒，也可以用来制备鸭甲肝病毒抗体上的应用。
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