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公开(公告)号：CN103820414B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410082929.3
申请日：2014-03-07
申请人： 成都欧林生物科技股份有限公司 , 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明提供一种变形链球菌重组亚单位基因工程获选疫苗抗原Glu的纯化方法，包含步骤：收集发酵的变形链球菌重组亚单位基因工程疫苗Glu蛋白的大肠杆菌菌体，采用高压匀浆破菌，收集上清，离心上清，收集沉淀；包涵体洗涤；包涵体裂解：用含尿素的PBS缓冲液重悬，离心，弃沉淀，保存上清；初步复性：取含尿素的PB缓冲液，将包涵体溶解液逐滴缓慢加入到上述搅拌的缓冲液中，离心，弃沉淀，上清上柱纯化；亲和层析纯化：在含尿素的PB缓冲液条件下对目的蛋白进行纯化，目的蛋白与填料结合后，用含氟化钠的PB缓冲液进行酶切洗脱，收集洗脱液即为层析纯化的Glu蛋白。采用本发明的方法纯化的抗原纯度高，工艺简捷。
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公开(公告)号：CN105669844A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610118225.6
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯化；4)将步骤3)处理后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化；5)将步骤4)纯化后的重组蛋白Vac33进行G25层析柱纯化；6)将步骤5)纯化后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化。本发明的纯化方法工艺简单，所获得目标蛋白纯度高，容易放大、重复性好，回收率较好。
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公开(公告)号：CN103820414A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410082929.3
申请日：2014-03-07
申请人： 重庆原伦生物科技有限公司 , 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C12N9/1051
摘要： 本发明提供一种变形链球菌重组亚单位基因工程获选疫苗抗原Glu的纯化方法，包含步骤：收集发酵的变形链球菌重组亚单位基因工程疫苗Glu蛋白的大肠杆菌菌体，采用高压匀浆破菌，收集上清，离心上清，收集沉淀；包涵体洗涤；包涵体裂解：用含尿素的PBS缓冲液重悬，离心，弃沉淀，保存上清；初步复性：取含尿素的PB缓冲液，将包涵体溶解液逐滴缓慢加入到上述搅拌的缓冲液中，离心，弃沉淀，上清上柱纯化；亲和层析纯化：在含尿素的PB缓冲液条件下对目的蛋白进行纯化，目的蛋白与填料结合后，用含氟化钠的PB缓冲液进行酶切洗脱，收集洗脱液即为层析纯化的Glu蛋白。采用本发明的方法纯化的抗原纯度高，工艺简捷。
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公开(公告)号：CN103060442A
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201210558739.5
申请日：2012-12-21
申请人： 重庆原伦生物科技有限公司 , 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明公开了一种变形链球菌的双重PCR快速检测方法，属于分子生物学技术领域。利用PCR方法扩增变形链球菌的特异基因片段，通过核酸电泳观察扩增结果。本发明通过针对变形链球菌spaP和dex两个基因的特异片段设计引物spaP F和spaP R、dex F和dex R，使得双重PCR快速检测中反应条件稳定，敏感性及特异性都强，能准确判断变形链球菌的感染。
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公开(公告)号：CN105647894A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610117826.5
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C12N9/52 , A61K39/104
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac11的纯化方法。该蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶酶切、Q HP层析、G 25层析、Q HP层析等层析技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac11。该发明纯化方法工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN105622733A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610118109.4
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C07K14/21
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac9的纯化方法。Vac9蛋白是铜绿假单胞菌细胞外膜蛋白，经重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、Prescission Protease(PP酶)酶切、Phenyl HP层析、G 25层析、Q HP去内毒素等技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac9。该发明纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，能够满足基因工程疫苗生产的需要，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN103099820B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201210558790.6
申请日：2012-12-21
申请人： 重庆原伦生物科技有限公司 , 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： A01K67/027 , A61K35/744 , A61K47/34
摘要： 本发明公开了一种变形链球菌感染及致龋动物模型建立方法，属于微生物学技术领域。通过变形链球菌口腔感染，80天后采标本，利用平板培养方法鉴定变形链球菌感染，染色观察龋坏并进行齿评分。本发明通过变形链球菌与卡波姆940混合，口腔感染SD大鼠，感染条件易控，感染率高（大于90%），感染稳定。用该方法感染SD大鼠并饲喂高糖饲料，可引起显著的龋坏。
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公开(公告)号：CN105669844B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201610118225.6
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯化；4)将步骤3)处理后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化；5)将步骤4)纯化后的重组蛋白Vac33进行G25层析柱纯化；6)将步骤5)纯化后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化。本发明的纯化方法工艺简单，所获得目标蛋白纯度高，容易放大、重复性好，回收率较好。
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公开(公告)号：CN105622734B
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201610118286.2
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac14的纯化方法。Vac14蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶酶切、SP HP层析、G 25层析、Q HP层析等技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac14。该发明纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN105622734A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610118286.2
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C07K14/21
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac14的纯化方法。Vac14蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶酶切、SP HP层析、G 25层析、Q HP层析等技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac14。该发明纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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