一种重组巴斯德毕赤酵母发酵表达生产牛肠激酶(轻链)突变体工艺

    公开(公告)号:CN115323022A

    公开(公告)日:2022-11-11

    申请号:CN202210975611.2

    申请日:2022-08-15

    摘要: 本发明公开了一种重组巴斯德毕赤酵母发酵表达生产牛肠激酶(轻链)突变体工艺,本发明涉及生物技术相关领域,包括对肠激酶菌种进行平板划线培养,对培养的种子液进行摇瓶培养,对摇瓶培养的种子液进行发酵罐培养,添加补料进行目标蛋白诱导表达,本发明所开发的重组肠激酶(轻链)采用酵母表达,所得重组肠激酶(轻链)rEK纯度高、活性强、性价比优越具有很强的国际市场竞争力,通过在肠激酶(轻链)的N端增加了KR两个氨基酸,提高重组肠激酶rEK的分泌表达量;同时将野生型第203位的G突变为S,提高酶的催化效率,通过在肠激酶(轻链)的C端添加组氨酸标签,简化纯化工艺步骤,提高产品纯度。

    一种重组人角质细胞生长因子-2及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116217697A

    公开(公告)日:2023-06-06

    申请号:CN202310127730.7

    申请日:2023-02-17

    摘要: 本发明涉及一种重组人角质细胞生长因子‑2及其制备方法和应用,其制备方法包括以下步骤,人工全基因合成所述重组人角质细胞生长因子‑2的核苷酸序列,并将其插入到pET‑28a(+)载体的NcoI和XhoI限制性酶切位点之间,得到重组载体pET‑28a(+)‑rhKGF‑2;将重组载体导入大肠杆菌BL21中,筛选高表达活化的转化子;培养转化子,并诱导表达重组人角质细胞生长因子‑2,表达完成后经后处理,得到rhKGF‑2。本发明解决了现有方法中表达得到的目的蛋白N端多出一个Met甚至多个氨基酸残基、需要加工修饰的问题,并能获得理化特性和生物学活性高、活性和纯度较高的rhKGF‑2,可用于预防和治疗急性肺损伤、呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病。