公开(公告)号：CN105734052A

公开(公告)日：2016-07-06

申请号：CN201610242527.4

申请日：2016-04-19

申请人： 武汉生命之美科技有限公司

发明人： 吴启家 ,  黄冉 ,  余凤云 ,  陈栋

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/68 ,  C40B50/06

CPC分类号： C12N15/1096 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2525/191 ,  C12Q2535/122

摘要： 本发明属于基因组学技术领域，具体涉及一种简化CAGE?seq建库方法。本方法采用富集含帽子结构的mRNA及lncRNA，并特异性加上5’端接头，片段化处理后，进行逆转录，进一步富集5’端信息。整个方法中糅合了现有成熟gnomegen公司RNA?seq kit。本方法操作更简单、成功率高，也能特异性富集5’端信息，对于鉴定整个细胞内mRNA的转录起始位点，从而获得准确的启动子信息和5’UTR信息更有帮助。是研究基因表达的有力方式，适用与基因调控网络研究。

公开(公告)号：CN105734053B

公开(公告)日：2018-12-14

申请号：CN201610247908.1

申请日：2016-04-20

申请人： 武汉生命之美科技有限公司

发明人： 张翼 ,  余凤云 ,  陈栋 ,  让文亮

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06

摘要： 本发明涉及一种简化测定PolyA长度的建库方法。本方法采用RNaseT1酶对总RNA进行片段化处理，然后用磁珠调取富集含PolyA尾巴的RNA，并用RT‑PCR方法检测RNaseT1酶切效率，随后加上gnomegen公司试剂盒的3’接头，最后采用epicentre试剂盒进行cDNA合成，用gnomegen公司的RT引物替换epicentre试剂盒中的RT引物。整个方法中糅合了现有成熟的建库试剂盒。操作更简单、成功率高，也能特异性富集3’端信息，可以测定细胞内mRNA的polyA长度。作为一种潜在工具去解析mRNA降解和翻译的动态调控过程，也能够发现一些RNA裂解和加尾的未知特点。

公开(公告)号：CN105734052B

公开(公告)日：2018-12-14

申请号：CN201610242527.4

申请日：2016-04-19

申请人： 武汉生命之美科技有限公司

发明人： 吴启家 ,  黄冉 ,  余凤云 ,  陈栋

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06

摘要： 本发明属于基因组学技术领域，具体涉及一种简化CAGE‑seq建库方法。本方法采用富集含帽子结构的mRNA及lncRNA，并特异性加上5’端接头，片段化处理后，进行逆转录，进一步富集5’端信息。整个方法中糅合了现有成熟gnomegen公司RNA‑seq kit。本方法操作更简单、成功率高，也能特异性富集5’端信息，对于鉴定整个细胞内mRNA的转录起始位点，从而获得准确的启动子信息和5’UTR信息更有帮助。是研究基因表达的有力方式，适用与基因调控网络研究。

公开(公告)号：CN105779439A

公开(公告)日：2016-07-20

申请号：CN201610242701.5

申请日：2016-04-19

申请人： 武汉生命之美科技有限公司

发明人： 张翼 ,  余凤云 ,  乔明 ,  陈栋

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/68 ,  C40B50/06

CPC分类号： C12N15/1096 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2525/191 ,  C12Q2521/319 ,  C12Q2535/122

摘要： 本发明属于基因组学技术领域，具体涉及一种能特异性获取5’ CAP序列信息的微量CAGE?seq文库构建方法，运用T4 PNK和TEX酶的组合作用，消除了总 RNA中5’端没有5’帽结构的RNA，保留了所有带有5’帽结构的RNA,设计相应的RT 引物和TS引物，在逆转录和模板置换过程中，富集RNA 5’端的信息，再通过PCR，引入测序引物和barcode序列。该方法避免繁琐的半抑制PCR过程，缩短建库时间，简化了实验流程；起始RNA用量较低，约100ng?1ug；是研究基因表达的有力方式，适用与基因调控网络研究。

公开(公告)号：CN105734053A

公开(公告)日：2016-07-06

申请号：CN201610247908.1

申请日：2016-04-20

申请人： 武汉生命之美科技有限公司

发明人： 张翼 ,  余凤云 ,  陈栋 ,  让文亮

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/68 ,  C40B50/06

CPC分类号： C12N15/1096 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2525/173 ,  C12Q2535/122

摘要： 本发明涉及一种简化测定PolyA长度的建库方法。本方法采用RNaseT1酶对总RNA进行片段化处理，然后用磁珠调取富集含PolyA 尾巴的RNA，并用RT?PCR方法检测RNaseT1酶切效率，随后加上gnomegen公司试剂盒的 3’接头，最后采用epicentre试剂盒进行cDNA合成，用gnomegen公司的RT引物替换epicentre 试剂盒中的RT引物。整个方法中糅合了现有成熟的建库试剂盒。操作更简单、成功率高，也能特异性富集3’端信息，可以测定细胞内mRNA的polyA长度。作为一种潜在工具去解析mRNA降解和翻译的动态调控过程，也能够发现一些RNA裂解和加尾的未知特点。