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公开(公告)号：CN113969269B
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202110475247.9
申请日：2021-04-29
申请人： 永农生物科学有限公司 , 华东理工大学 , 宁夏永农生物科学有限公司
摘要： 本申请涉及D‑氨基酸氧化酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用。所述D‑氨基酸氧化酶突变体当与包含SEQ ID NO.1所示序列的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列比对时，所述D‑氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列包含对应于第62位和/或第226位的氨基酸残基的替换，所述第62位和第226位是参照SEQ ID NO.1限定的，并且所述D‑氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示序列具有至少90％的同一性。
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公开(公告)号：CN113969268A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202110475238.X
申请日：2021-04-29
申请人： 永农生物科学有限公司 , 华东理工大学 , 宁夏永农生物科学有限公司
摘要： 本申请涉及Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用。所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体当与包含SEQ ID NO.5所示序列的Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶的氨基酸序列比对时，所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体的氨基酸序列包含对应于第91位和/或第168位的氨基酸残基的替换，所述第91位和第168位是参照SEQ ID NO.5限定的，并且所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.5所示序列具有至少90％的同一性。
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公开(公告)号：CN113969268B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202110475238.X
申请日：2021-04-29
申请人： 永农生物科学有限公司 , 华东理工大学 , 宁夏永农生物科学有限公司
摘要： 本申请涉及Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用。所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体当与包含SEQ ID NO.5所示序列的Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶的氨基酸序列比对时，所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体的氨基酸序列包含对应于第91位和/或第168位的氨基酸残基的替换，所述第91位和第168位是参照SEQ ID NO.5限定的，并且所述Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.5所示序列具有至少90％的同一性。
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公开(公告)号：CN113969269A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202110475247.9
申请日：2021-04-29
申请人： 永农生物科学有限公司 , 华东理工大学 , 宁夏永农生物科学有限公司
摘要： 本申请涉及D‑氨基酸氧化酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用。所述D‑氨基酸氧化酶突变体当与包含SEQ ID NO.1所示序列的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列比对时，所述D‑氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列包含对应于第62位和/或第226位的氨基酸残基的替换，所述第62位和第226位是参照SEQ ID NO.1限定的，并且所述D‑氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示序列具有至少90％的同一性。
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公开(公告)号：CN113717289A
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN202110836049.0
申请日：2021-07-23
申请人： 华东理工大学
摘要： 本发明涉及一种SAC‑TRAIL融合蛋白及其制备方法和应用，利用柔性链接(G4S)3将抗肿瘤蛋白TRAIL融合到SAC蛋白的C末端，形成所述的SAC‑TRAIL融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；该融合蛋白的制备方法包括以下步骤：(1)构建pET28a/SUMO‑SAC‑TRAIL重组质粒；(2)利用大肠杆菌BL21(DE3)异源表达SUMO‑SAC‑TRAIL融合蛋白；(3)利用镍离子亲和层析和弱阳离子交换树脂高效分离纯化SAC‑TRAIL融合蛋白。与现有技术相比，本发明首次制备了SAC‑TRAIL融合蛋白，纯化蛋白的纯度达到94％，制备的蛋白药物SAC‑TRAIL能够有效抑制卵巢癌细胞SK‑OV‑3和乳腺癌细胞MCF‑7的增殖，IC50值分别为4.42ng/mL和0.053μg/mL。
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公开(公告)号：CN103755814B
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201410016426.6
申请日：2014-01-14
申请人： 华东理工大学
CPC分类号： C07K14/54 , A61K38/00 , C07K2319/03 , C07K2319/04 , C07K2319/10
摘要： 一种TAT-IL-24-KDEL融合蛋白，是指TAT穿膜肽和内质网定位信号肽KDEL分别连接在白细胞介素-24(IL-24)的N端和C端的融合蛋白。其制备步骤包括：PCR扩增获取TAT-IL-24-KDEL编码基因，利用pET28-SUMO作为载体，转化BL21(DE3)，异源表达带有SUMO标签的TAT-IL-24-KDEL融合蛋白。由于融合蛋白以包涵体形式表达，经过变复性、镍柱纯化和标签去除操作后获得高纯度的TAT-IL-24-KDEL融合蛋白。利用流式细胞实验检测纯化的TAT-IL-24-KDEL融合蛋白对乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用，利用免疫荧光实验检测融合蛋白在胞内的定位情况。本发明首次制备了TAT-IL-24-KDEL融合蛋白，纯度达到92％，能够有效定位于内质网上从而促进乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。
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公开(公告)号：CN103864914B
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201410119737.5
申请日：2014-03-27
申请人： 华东理工大学
摘要： 本发明涉及一种高纯度白细胞介素?24包涵体的制备方法，包括以下步骤：制备含有白细胞介素?24基因的重组大肠杆菌；重组大肠杆菌进行发酵培养；发酵培养后得到的菌体进行超声破碎得到包涵体；对包涵体进行洗涤；对洗涤后的包涵体进行变性与复性，得到白细胞介素?24蛋白。与现有技术相比，本发明通过对大肠杆菌生产白细胞介素?24培养条件进行优化，获得较疏松的白细胞介素?24包涵体结构，提高了蛋白在高浓度下的复性的效率，同时，本发明方法使白细胞介素?24的变性效率和复性效率分别提高了50.52％和83.78％，操作简单，节约了生产成本。这种通过优化培养条件来简化其纯化过程的方法可适用于其它有类似包涵体结构特点的蛋白。
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公开(公告)号：CN103980366A
公开(公告)日：2014-08-13
申请号：CN201410187998.0
申请日：2014-05-06
申请人： 华东理工大学
摘要： 本发明提供一种白介素融合蛋白及其制备方法和应用。所述白介素融合蛋白包括：(1)白介素IL-24；(2)解离素多肽CN；以及(3)位于所述白介素IL-24和所述解离素多肽CN之间的由0-20个氨基酸构成的连接肽。本发明首次提供且制备出IL-24与CN的融合蛋白，且所述白介素融合蛋白在本发明中所述宿主细胞中以可溶形式表达；所述白介素融合蛋白与单独的IL-24和CN相比具有更高的与肿瘤细胞的相互作用力，可显著诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的迁移或侵袭，且对正常细胞无毒副作用；本发明所述的白介素融合蛋白具有比白介素IL-24更显著更优异的抗肿瘤活性，且可用于多种肿瘤的治疗。
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公开(公告)号：CN103980366B
公开(公告)日：2017-08-11
申请号：CN201410187998.0
申请日：2014-05-06
申请人： 华东理工大学
摘要： 本发明提供一种白介素融合蛋白及其制备方法和应用。所述白介素融合蛋白包括：(1)白介素IL‑24；(2)解离素多肽CN；以及(3)位于所述白介素IL‑24和所述解离素多肽CN之间的由0‑20个氨基酸构成的连接肽。本发明首次提供且制备出IL‑24与CN的融合蛋白，且所述白介素融合蛋白在本发明中所述宿主细胞中以可溶形式表达；所述白介素融合蛋白与单独的IL‑24和CN相比具有更高的与肿瘤细胞的相互作用力，可显著诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的迁移或侵袭，且对正常细胞无毒副作用；本发明所述的白介素融合蛋白具有比白介素IL‑24更显著更优异的抗肿瘤活性，且可用于多种肿瘤的治疗。
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公开(公告)号：CN103755814A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410016426.6
申请日：2014-01-14
申请人： 华东理工大学
CPC分类号： C07K14/54 , A61K38/00 , C07K2319/03 , C07K2319/04 , C07K2319/10
摘要： 一种TAT-IL-24-KDEL融合蛋白，是指TAT穿膜肽和内质网定位信号肽KDEL分别连接在白细胞介素-24(IL-24)的N端和C端的融合蛋白。其制备步骤包括：PCR扩增获取TAT-IL-24-KDEL编码基因，利用pET28-SUMO作为载体，转化BL21(DE3)，异源表达带有SUMO标签的TAT-IL-24-KDEL融合蛋白。由于融合蛋白以包涵体形式表达，经过变复性、镍柱纯化和标签去除操作后获得高纯度的TAT-IL-24-KDEL融合蛋白。利用流式细胞实验检测纯化的TAT-IL-24-KDEL融合蛋白对乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用，利用免疫荧光实验检测融合蛋白在胞内的定位情况。本发明首次制备了TAT-IL-24-KDEL融合蛋白，纯度达到92％，能够有效定位于内质网上从而促进乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。
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