公开(公告)号：CN112812983A

公开(公告)日：2021-05-18

申请号：CN202110176165.4

申请日：2021-02-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  周武林 ,  邵明龙 ,  杨套伟 ,  张显 ,  徐美娟

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/90 ,  C12N15/53 ,  C12N15/55 ,  C12P33/00 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种生产菜油甾醇的酿酒酵母工程菌及构建方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明通过将7‑脱氢胆固醇还原酶的表达盒元件导入到酵母细胞体内，利用CRISPR/Cas9基因操作系统整合至酵母基因组中，还敲除了C‑22甾醇去饱和酶，解除麦角固醇分支途径的竞争，实现了从葡萄糖到菜油甾醇的酵母合成。本发明的方法工艺简单，绿色环保，可用于发酵生产菜油甾醇。采用本发明提供酿酒酵母工程菌株BY4742‑Δerg5‑TEF1p‑dhcr7‑ADH1t制备得到的菜油甾醇的产量，在摇瓶阶段可达253.35mg/L，发酵罐水平产量可达916.88mg/L，比菌株在摇瓶阶段菜油甾醇的产量提升了2.6倍。

公开(公告)号：CN112812983B

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN202110176165.4

申请日：2021-02-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  周武林 ,  邵明龙 ,  杨套伟 ,  张显 ,  徐美娟

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/90 ,  C12N15/53 ,  C12N15/55 ,  C12P33/00 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种生产菜油甾醇的酿酒酵母工程菌及构建方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明通过将7‑脱氢胆固醇还原酶的表达盒元件导入到酵母细胞体内，利用CRISPR/Cas9基因操作系统整合至酵母基因组中，还敲除了C‑22甾醇去饱和酶，解除麦角固醇分支途径的竞争，实现了从葡萄糖到菜油甾醇的酵母合成。本发明的方法工艺简单，绿色环保，可用于发酵生产菜油甾醇。采用本发明提供酿酒酵母工程菌株BY4742‑Δerg5‑TEF1p‑dhcr7‑ADH1t制备得到的菜油甾醇的产量，在摇瓶阶段可达253.35mg/L，发酵罐水平产量可达916.88mg/L，比菌株在摇瓶阶段菜油甾醇的产量提升了2.6倍。