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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105969748B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201610576989.X
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种提高γ‑谷氨酰转肽酶表达量的方法，主要是将GGT基因3′末端终止子后添加形式为AAA,AAAAAA,TTTAAA,AAATTTAAA,TTTAAATTTAAA,TTTAAAAAAAAA的poly(A/T)尾巴，提高其在钝齿棒杆菌中的表达量，属于基因工程和酶工程领域。本发明在于通过在GGT基因3′末端终止子后添加形式为TTTAAA的poly(A/T)尾巴，发现与不添加poly(A/T)尾巴的对照菌相比，GGT在钝齿棒杆菌中的表达量提高了2倍多，这说明添加形式为TTTAAA的poly(A/T)尾巴有利于提高GGT在钝齿棒杆菌中的表达量。
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公开(公告)号：CN105969748A
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201610576989.X
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种提高γ‑谷氨酰转肽酶表达量的方法，主要是将GGT基因3′末端终止子后添加形式为AAA,AAAAAA,TTTAAA,AAATTTAAA,TTTAAATTTAAA,TTTAAAAAAAAA的poly(A/T)尾巴，提高其在钝齿棒杆菌中的表达量，属于基因工程和酶工程领域。本发明在于通过在GGT基因3′末端终止子后添加形式为TTTAAA的poly(A/T)尾巴，发现与不添加poly(A/T)尾巴的对照菌相比，GGT在钝齿棒杆菌中的表达量提高了2倍多，这说明添加形式为TTTAAA的poly(A/T)尾巴有利于提高GGT在钝齿棒杆菌中的表达量。
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公开(公告)号：CN104789538A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510146329.3
申请日：2015-03-30
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1044 , C12P13/04 , C12Y203/02013
Abstract: 一种利用分批添加双底物的方法对重组pMA5-ggt/Bacillus.subtilis分泌的γ-谷氨酰转肽酶催化L-谷氨酰胺和乙胺生成L-茶氨酸的工艺进一步优化，属于发酵工程和酶工程领域。本发明采用前期工作构建的分泌γ-谷氨酰转肽酶的枯草芽孢杆菌，对菌株进行发酵罐培养。浓缩上清粗酶液，应用于茶氨酸的转化。在此基础上，通过分批添加底物实现对转化过程的进一步调控，在含60U/mL酶液的反应体系中，每隔2个小时向其中添加底物谷氨酰胺和乙胺，谷氨酰胺的添加量固定在20mM，供体受体比例控制在1：12时，pH调整为10，18小时后可得到茶氨酸164.2mM，谷氨酰胺转化率达到91.2％。该方法具有操作简单，成本低，茶氨酸产量高，底物转化率高等优点，有利于工业放大生产。
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公开(公告)号：CN106085938A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610454875.8
申请日：2016-06-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1044 , C12P13/04 , C12Y203/02013
Abstract: 一种利用重组钝齿棒杆菌高效合成L‑茶氨酸的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先验证了枯草芽孢杆菌来源的GGT信号肽可以实现GGT在C.glutamicum体系中分泌表达。同时重组菌C.glutamicum SDNN403/pXMJ19‑tacM‑ggt的胞外酶活约为C.glutamicum SDNN403/pXMJ19‑ggt的2倍，这说明tacM启动子更有利于GGT酶活的合成。采用底物流加策略高产L‑茶氨酸，转化体系包含：终浓度为0.8U/mL的GGT，pH 10，37℃，从0h开始每隔两个小时补加22mmol/L的L‑谷氨酰胺，66mmol/L的乙胺。批次流加在12h时达到最大茶氨酸产量118mmol，转化率为92.8％。本文首次实现B.subtilis来源的γ‑谷氨酰转肽酶基因(ggt)在C.glutamicum SDNN403中分泌表达，通过分批流加底物获得目前报道的利用重组C.glutamicum合成L‑茶氨酸的最高产量。
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公开(公告)号：CN104404075A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410747714.9
申请日：2014-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种利用重组Bacillus subtilis分泌γ-谷氨酰转肽酶来催化L-谷氨酰胺和乙胺生成L-茶氨酸的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明扩增枯草芽孢杆菌中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的基因，并克隆到枯草芽孢杆菌168中的过量表达。首次构建了一株能够分泌γ-谷氨酰转肽酶的枯草芽孢杆菌工程菌株，对菌株的酶活力及酶的发酵性能进行研究：重组菌发酵上清酶活达到49.8U/mg，是出发菌株的20倍；以80mM L-谷氨酰胺为供体，640mM乙胺作为受体，L-茶氨酸转化率达到86％以上。本发明使用的是安全菌株，且具有转化率高，生产方法简单等优点，有利于在工业规模酶法生产L-茶氨酸的生产。
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