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公开(公告)号：CN118773031A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202410842996.4
申请日：2024-06-27
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种一步合成高磺酸化度的硫酸软骨素的重组毕赤酵母菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学的手段对硫酸软骨素合成过程进行分步表达优化，包括软骨素合成途径优化、提高C4ST提高表达量，强化PAPS胞内循环与再生。本发明首次在毕赤酵母实现了胞内高磺酸化硫酸软骨素的一步合成，实现了一步反应合成98％磺酸化度的硫酸软骨素。
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公开(公告)号：CN118006578A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410134070.X
申请日：2024-01-31
申请人： 江南大学 , 华熙生物科技股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种酶活提高的软骨素4‑O‑硫酸转移酶突变体及其生产方法，属于生物技术领域。本发明首先通过对鼠源的软骨素4‑O‑硫酸转移酶进行N端截短、融合短肽、优化连接肽、5'UTR改造及过表达分子伴侣，胞外酶活达到了1346.2U/L，相比于出发菌提高了21.7倍，进一步通过定点突变将酶活提高到了38895.1U/L，是出发菌株的627.3倍，这是目前报道的最高水平，为工业化生产非动物源硫酸软骨素奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN112280726B
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202011191374.8
申请日：2020-10-30
申请人： 江南大学 , 水羊化妆品制造有限公司
摘要： 本发明公开了一种高产四氢嘧啶工程菌株的构建方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了能够在低盐条件下生产四氢嘧啶的E.coli BL21(DE3)重组菌，该菌包含由T7启动子控制的、具有特定RBS序列的外源基因ectA，ectB和ectC，并使用sRNA技术对ptsG，pta，thrA和lysA基因进行了转录后水平抑制。本发明构建的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，发酵72h后，四氢嘧啶产量可达30g/L。
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公开(公告)号：CN117384812A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311320966.9
申请日：2023-10-12
申请人： 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种生产肝素前体的重组大肠杆菌及其构建和应用。本发明以益生菌大肠杆菌Nissle 1917为宿主，通过研究KfiB在肝素前体合成中的作用并研究KfiB和肝素前体合酶KfiAC之间的量级变化来设计提高肝素前体的产量，明确了kfiACB表达的最优结构，通过不同组合优化肝素前体产量达到0.349g/L，并在突变文库中筛选RBS进一步优化kfiACB的表达量，肝素前体产量在摇瓶上可以达到0.97g/L，相比于野生型菌株产量提高了6倍以上。
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公开(公告)号：CN116640745A
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202310784916.X
申请日：2023-06-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及透明质酸酶突变体及其在水解硫酸软骨素中的应用，属于生物工程技术领域。本发明的透明质酸酶突变体是将位于水蛭来源透明质酸酶的底物结合口袋中的氨基酸残基进行突变后得到的蛋白质，具体是以氨基酸序列SEQ ID NO.1所示的透明质酸酶为出发序列，将第65位的苯丙氨酸突变为丝氨酸；和/或将第180位苏氨酸突变为精氨酸。本发明应用定向进化技术和方法对透明质酸酶进行了改造，其中，所得双突变体对于硫酸软骨素的催化效率提高了15.9倍，并将其应用于低分子量硫酸软骨素的水解催化，具有重要的应用前景。
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公开(公告)号：CN116515725A
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN202310453345.1
申请日：2023-04-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种产聚唾液酸的重组EcN大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先在大肠杆菌EcN(Escherichia coli Nissle 1917)中筛选异源表达聚唾液酸合酶neuD、neuB、neuA、neuC、neuE和neuS，通过替换转运蛋白KpsF、KpsE、KpsD、KpsU、KpsC、KpsS、KpsM、KpsT，摇瓶水平达到0.5g/L，发酵罐优化聚唾液酸产量达到7g/L。
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公开(公告)号：CN113717965B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202111088551.4
申请日：2021-09-16
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种链霉菌胰蛋白酶特异性改造的方法及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在毕赤酵母中异源表达灰色链霉菌胰蛋白酶SGT，并对其进行突变，得到了两个能够显著提升对精氨酸特异性识别效率的突变体，使得突变体对Tos‑Gly‑Pro‑Arg‑AMC催化效率达到了36000ml‑1min‑1，适用于胰岛素及胰岛素类似物的生产，从而在工业中具有良好应用前景。
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公开(公告)号：CN113881612B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202110392140.8
申请日：2021-04-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种产肝素前体的重组大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先在大肠杆菌EcN(Escherichia coli Nissle 1917)中筛选异源表达UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺和UDP‑葡萄糖醛酸途径基因glmS、glmM和glmU以及galU和ugd，通过途径基因组合，过表达EcN来源肝素前体合酶基因，摇瓶水平达到1.29g/L，发酵罐优化肝素前体产量达到15g/L。
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公开(公告)号：CN113046403B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202011069179.8
申请日：2020-09-30
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12P19/40
摘要： 本发明公开了一种基于构建ATP再生系统高效催化合成PAPS的方法，属于生物工程技术领域。通过微生物重组表达人工构建PAPS合成双功能酶，实现了PAPS的高效率生产。在此基础上，耦联了谷氨酸棒杆菌和结核分枝杆菌来源的聚磷酸激酶的ATP再生系统，可同时回收两种副产物焦磷酸和ADP，实现底物与产物的等量转化，催化体系中生成的PAPS具有较高的纯度，能实现大部分磺酸转移反应中磺酸基团的供给。
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公开(公告)号：CN113046402B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202011069389.7
申请日：2020-09-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法，属于生物技术领域。本发明首先对不同来源的ATP硫酸化酶和APS激酶进行优选，利用蛋白质融合技术，将优选所得的ATP硫酸化酶和APS激酶之间融合一段不同的蛋白接头(linker)，构建了双功能PAPS合酶。进一步对linker进行理性设计和改造，大大提高了转化效率，并简化了酶催化剂的获取，减少酶催化剂在制备过程中的损失。使得ATP转化率提高了25％，催化时间缩短59％。此外通过突变ATP硫酸化酶P环HRAH序列为HNGH和HAGH，进一步提高其酶活，使得PAPS的转化率可达48％。
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