公开(公告)号：CN118638758A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410837216.7

申请日：2024-06-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 曾伟主 ,  周景文 ,  张辉虎 ,  陈坚 ,  王兴隆 ,  李冬

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P33/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高积雪草酸C28‑O葡萄糖糖基化修饰的方法，属于酶工程技术领域。本发明筛选了催化效率提高的UDP‑葡萄糖基转移酶CaUGT73AD1，通过更换启动子及融合促溶标签，提高了CaUGT73AD1的可溶性表达水平和积雪草酸的转化效率；进一步通过对CaUGT73AD1表面电荷优化，获得了CaUGT73AD1突变体。在大肠杆菌中完成上述优化可使葡萄糖糖基化修饰积雪草酸生成积雪草酸单葡萄糖苷的转化率提高至67.6％。进一步将上述优化用于双质粒表达的酶级联催化积雪草酸合成积雪草苷的系统中，可使积雪草苷产量增加3.37倍。

公开(公告)号：CN113913400B

公开(公告)日：2022-12-27

申请号：CN202111420059.2

申请日：2021-11-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  陈玥 ,  李江华 ,  陈坚 ,  曾伟主

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12P17/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了催化活性提高的L‑山梨酮脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨酮脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了酶活提升的L‑山梨酮脱氢酶突变体M167L、S453A、L460V、E471D和M167L‑S453A‑E471D，使突变体的比酶活达4.20U/mg、1.67U/mg、3.00U/mg、1.73U/mg、2.82U/mg，与野生酶相比提高了1.1～2.6倍，有助于实现L‑山梨酮脱氢酶参与的代谢途径相关产物产量的提高。

公开(公告)号：CN113913400A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111420059.2

申请日：2021-11-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  陈玥 ,  李江华 ,  陈坚 ,  曾伟主

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12P17/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了催化活性提高的L‑山梨酮脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨酮脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了酶活提升的L‑山梨酮脱氢酶突变体M167L、S453A、L460V、E471D和M167L‑S453A‑E471D，使突变体的比酶活达4.20U/mg、1.67U/mg、3.00U/mg、1.73U/mg、2.82U/mg，与野生酶相比提高了1.1～2.6倍，有助于实现L‑山梨酮脱氢酶参与的代谢途径相关产物产量的提高。

公开(公告)号：CN114934028B

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN202210784572.8

申请日：2022-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  陈坚 ,  李江华 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了L‑山梨糖脱氢酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨糖脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了可以提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体。表达突变体的重组菌株RS‑V368A、RS‑V336I‑V368A、RS‑V336L‑V368A和RS‑V336M‑V368A发酵72小时后2‑KLG的产量达4.01g/L、4.92g/L、3.84g/L和3.53g/L。

公开(公告)号：CN114934027A

公开(公告)日：2022-08-23

申请号：CN202210756716.9

申请日：2022-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  李江华 ,  陈坚 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12P17/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了可提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨糖脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了可以提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体。通过发酵检测，突变体V368C、V368L、V368S和V368T的2‑KLG产量分别达到2.5g/L、3.1g/L、2.5g/L和3.0g/L，分别为表野生型L‑山梨糖脱氢酶菌株的1.1、1.4、1.1和1.3倍。

公开(公告)号：CN118995681A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411225351.2

申请日：2024-09-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  曾伟主 ,  乌仁嘎 ,  徐沙 ,  李冬

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P7/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的甲基转移酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建了催化能力提高的甲基转移酶突变体。在适当的培养条件下，表达突变体W98A、W98K或W98K/M43Y的菌株在摇瓶水平的香兰素产量可比野生型菌株提高12.8～26.4％。本发明还将构建的菌株进行发酵罐水平的发酵，可使菌株发酵60h的香兰素产量达到683.1mg/L，处于世界领先水平。

公开(公告)号：CN114934027B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202210756716.9

申请日：2022-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  李江华 ,  陈坚 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12P17/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了可提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨糖脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了可以提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体。通过发酵检测，突变体V368C、V368L、V368S和V368T的2‑KLG产量分别达到2.5g/L、3.1g/L、2.5g/L和3.0g/L，分别为表野生型L‑山梨糖脱氢酶菌株的1.1、1.4、1.1和1.3倍。

公开(公告)号：CN114934028A

公开(公告)日：2022-08-23

申请号：CN202210784572.8

申请日：2022-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  陈坚 ,  李江华 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了L‑山梨糖脱氢酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨糖脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了可以提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体。表达突变体的重组菌株RS‑V368A、RS‑V336I‑V368A、RS‑V336L‑V368A和RS‑V336M‑V368A发酵72小时后2‑KLG的产量达4.01g/L、4.92g/L、3.84g/L和3.53g/L。