公开(公告)号：CN118702823A

公开(公告)日：2024-09-27

申请号：CN202410884241.0

申请日：2024-07-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  王晴 ,  李懿琛 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了核酸编辑工具及其应用,属于基因工程和生物诱变技术领域。本发明基于RNA聚合酶在转录过程中解旋dsDNA，将胞苷脱氨酶pmCDA1、尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)逐步与RNA聚合酶融合，构建高效诱变质粒，将pmCDA1、UGI定位在瞬时ssDNA周围，实现C→T碱基转换，最终使谷氨酸棒杆菌基因组突变率提高3157.38倍。本发明构建的高效诱变质粒成功用于筛选耐受氧化应激的谷氨酸棒杆菌突变株，也对筛选其他抗压力胁迫突变体具有重要指导意义。由于RNA聚合酶的高度保守性，这种方法很容易应用在其他谷氨酸棒杆菌亚种或其他微生物中。

公开(公告)号：CN118638837A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410838024.8

申请日：2024-06-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  王晴 ,  李懿琛 ,  邵明龙 ,  张显

IPC: C12N15/77 ,  C12N9/78 ,  C12N9/14 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12N1/36 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明涉及一种谷氨酸棒杆菌基因组进化的系统、连续进化方法及应用。基于DNA解旋酶在转录过程中解旋dsDNA，将胞嘧啶脱氨酶pmCDA1与DNA解旋酶融合，提高谷氨酸棒杆菌的基因组突变率。应用本发明的连续进化方法提高谷氨酸棒杆菌的乙醇耐受性，获得在13％乙醇浓度下生物量提高10.17倍的突变株。通过全基因组测序鉴定出编码醛脱氢酶的Cgl2467基因的L213W突变对谷氨酸棒杆菌乙醇耐受性提高具有重要作用，并首次鉴定了Cgl2467具有乙醛脱氢酶活性。本发明公开的连续进化方法对筛选其他鲁棒性增强的突变体具有重要指导意义，本发明鉴定的乙醛脱氢酶有助于对谷氨酸棒杆菌乙醇代谢有新的认识。