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公开(公告)号：CN114250215B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202111483679.0
申请日：2021-12-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种超嗜热II型普鲁兰酶及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对超嗜热II型普鲁兰酶进行氨基酸突变，获得了超嗜热II型普鲁兰酶突变体Q13H、I25E和Q13H/I25E。本发明获得的突变体催化性能有了很大的提高，且突变体在反应过程中不需要其他金属离子辅助(例如Ca2+)，有助于降低产物提取成本。本发明构建的突变体具有极强的热稳定性，在100℃保温10h还剩余50％的酶活，并具有较为广泛的pH活性范围和pH耐受性，在pH 5.8‑7.0范围保有70％活性，于不同的pH下，4℃放置剩余酶活均在75％以上，能很好的应用于淀粉工业中的糖化过程中。
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公开(公告)号：CN115322981A
公开(公告)日：2022-11-11
申请号：CN202210399507.3
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其在制备酰胺类化合物中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。
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公开(公告)号：CN114277022A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111465494.7
申请日：2021-12-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的腈水合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第50位谷氨酸突变为亮氨酸得到突变体E50L，本发明提供的突变体E50L催化烟腈的比酶活提高到353.53±22.34U/mg，比野生型提高了5.83倍。在提高酶活的同时，突变体保持了Pt NHase热稳定性良好的优势且耐受性有一定的提高。兼具较高酶活、良好热稳定性以及底物耐受性的突变体的成功构建，增强了研究者对于理性设计方法改造蛋白提高酶活的信心，进一步推动后续Pt NHase的工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN114250245A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111466182.8
申请日：2021-12-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cpf1的高效基因编辑系统的构建，属于基因工程技术领域。本发明首先表征了来自于F.novicida的Cas蛋白Cpf1，将FnCpf1整合到枯草芽孢杆菌基因组的lacA位点。靶向不同基因的crRNA，将该crRNA置于枯草芽孢杆菌来源的强组成型启动子Pveg的下游，用于高强度表达对应的crRNA。通过选用不同靶向基因的crRNA，该基因组编辑方法被验证。菌落PCR结果显示，sacA基因，ligDV基因以及pps基因簇均能够实现高效的敲除。同时，为了验证该系统的敲入效率，外源基因sfGFP被高效敲除到sacA位点。为了进一步验证该系统的多基因敲除效率，本发明选择了sacA和aprE作为靶标，菌落PCR结果显示出了高效的敲除效率。
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公开(公告)号：CN114250215A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111483679.0
申请日：2021-12-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种超嗜热II型普鲁兰酶及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对超嗜热II型普鲁兰酶进行氨基酸突变，获得了超嗜热II型普鲁兰酶突变体Q13H、I25E和Q13H/I25E。本发明获得的突变体催化性能有了很大的提高，且突变体在反应过程中不需要其他金属离子辅助(例如Ca2+)，有助于降低产物提取成本。本发明构建的突变体具有极强的热稳定性，在100℃保温10h还剩余50％的酶活，并具有较为广泛的pH活性范围和pH耐受性，在pH 5.8‑7.0范围保有70％活性，于不同的pH下，4℃放置剩余酶活均在75％以上，能很好的应用于淀粉工业中的糖化过程中。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111019964B
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN201911421812.2
申请日：2019-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造钴内稳态减少腈水合酶生产中钴用量的方法，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明所述方法中使用的Co2+内稳态系统是通过引入外排蛋白RcnA和摄取蛋白NiCoT构建而成的。在人工Co2+内稳态的帮助下，大肠杆菌对于高浓度的Co2+耐受性增强，同时使用型诱导系统表达外源基因时，蛋白可被更低浓度的Co2+有效诱导。将该系统应用于腈水合酶生产时，达到最大酶活的Co2+使用量从500μM降低至300μM，在腈水合酶的酶活和产量不变的基础上，可以显著降低Co2+的使用量，降低了生产成本，减少了生产过程中对环境的潜在污染。
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公开(公告)号：CN112522245A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011450235.2
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。本发明对来源于嗜热假诺卡氏菌腈水合酶做了改造，分别是对野生型对β亚基上的46号位，α亚基上的6、126号位进行了突变，构建得到的突变体比酶活显著提升，可较野生型提升1‑5倍。且底物谱也得到拓宽，对于异丁腈、正戊腈、丙烯腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈和萘甲腈等均有很好的催化作用，并且对相应底物的催化性能也显著提升。使得到的腈水合酶突变体能适用于更多的生产场景，并提高生产效率。
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公开(公告)号：CN112501151A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011450515.3
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第48号构建的单点突变体L48D和L48H的酶活分别为750.26±1.63U/mg、820.01±0.98U/mg，与未进行改造的野生型腈水合酶的比酶活220.30±2.28U/mg相比，都有明显的提高。其中，突变体L48D与突变体L48H的酶活分别为野生型的3.4和3.7倍。上述这两个氨基酸残基的突变显著改善腈水合酶催化活性，有利于应用于工业上精细化学品如烟酰胺的生产，提高催化效率，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN112481278A
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202011449689.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于AIP诱导的生物传感器及其应用，属于基因工程技术领域。本发明将agr群体感应系统感受AIP的关键组分异源构建至枯草芽孢杆菌168中，使其能够在AIP的诱导下表达绿色荧光蛋白sfGFP。利用该系统，可以通过sfGFP的表达荧光反应AIP的浓度。同时将AIP合成相关基因异源构建至大肠杆菌中，使得大肠杆菌能够合成分泌AIP，获得AIP产生菌。在AIP产生菌中建立AIP的突变体库，在AIP感应菌种筛选突变的AIP，实现AIP高通量突变和筛选。该系统能够方便地研究AIP不同位点突变对其功能的影响，并且获得具有不同特性的突变体AIP。
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公开(公告)号：CN112322607A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011307749.2
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种融合型腈水合酶及其应用，属于基因工程领域和酶工程领域。本发明公开了多种稳定性提高的亚基融合型腈水合酶，属于基因工程领域。本发明将来源于Pseudomonas putida NRRL 1886的腈水合酶作为初始对象，分别通过不同种类不同长度Linker融合其β亚基和α亚基，得到多种亚基融合型腈水合酶，稳定性得到显著提高。本发明方法简单高效，不仅得到了稳定性显著提高的腈水合酶可用于工业生产，还总结了基因融合影响腈水合酶稳定性的规律，为提高腈水合酶稳定性提高理论研究。
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