公开(公告)号：CN118667799A

公开(公告)日：2024-09-20

申请号：CN202410655495.5

申请日：2024-05-24

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  李萌 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12P17/12

摘要： 本发明公开了远端残基改造提高活性和稳定性的腈水解酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过对腈水解酶Nit6803与底物对接，确定Loop1‑Loop4，并进一步设计步进随机组合突变对Loop区进行随机突变，结合迭代组合突变，得到突变体M1‑M3，比酶活相较于WT均显著提升。进一步将突变体M3与催化口袋优选突变结合，得到突变体M4，其比酶活与热稳定性相较于WT均出现显著提升。本发明提供的远端残基改造策略能有效提高腈水解酶活性和稳定性，并且在其他种类酶性能提升方面也存在广阔前景。

公开(公告)号：CN118562775A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410793074.9

申请日：2024-06-19

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  宋晨硕 ,  韩来闯 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了嗜冷菌来源的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用，属于蛋白质工程领域。本发明中Gad‑PsyY的两种突变体相对于野生型，在60℃条件下热处理30min的残余酶活相较于野生型从原本的40％分别提升到了78％和52％，此外这两个突变体的最适催化温度相较于野生型也向高温处发生了3‑10℃的偏移。本发明提供了Gad‑PsyF的两种突变体相对于野生型，最适催化温度相较于野生型也向低温处发生了3‑10℃的偏移。本发明对于进一步深入认识谷氨酸脱羧酶的热适应机理和对其进行改造具有重要意义，同时也很大程度的解决了应用谷氨酸脱羧酶因热稳定性低或最适催化温度高从而导致常规生产条件下的产物产量低的问题。

公开(公告)号：CN114107269B

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202111395709.2

申请日：2021-11-23

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  马东 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02

摘要： 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。

公开(公告)号：CN114214308B

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202111476802.6

申请日：2021-12-06

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  刘欣悦 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/12 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明为了提高腈水解酶PCC6803酶活，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的烟酸传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度低的)的两个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行筛选，然后将荧光强度低的突变体重新构建至表达载体及宿主中表达及纯化，利用HPLC测定纯酶比酶活，最终获得比酶活比野生酶WT提高了57％、180％、555％的突变体。

公开(公告)号：CN114350645B

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202111457993.1

申请日：2021-12-02

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  程中一 ,  吴桐 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种新基因型腈水合酶及其重组表达，属于生物工程技术领域。所述腈水合酶来源于RoseomonasStagni，基因全长1014bp，编码336个氨基酸，并将其成功构建于大肠杆菌重组表达体系中。得到的目的蛋白以3‑氰基嘧啶为催化底物，可证明其是一种新型的腈水合酶，对烟腈有催化活力。并且将所述腈水合酶第250位精氨酸突变为丙氨酸后酶活提高了3.61倍，更加适于酰胺类物质在工业领域的生产。

公开(公告)号：CN112322606B

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202011307426.3

申请日：2020-11-20

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  郭军玲 ,  江诗进 ,  程中一 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。

公开(公告)号：CN114250189A

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN202111490749.5

申请日：2021-12-08

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  崔文璟 ,  索菲娅 ,  钱红宇 ,  韩来闯 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C07K14/315 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12Q1/18 ,  G01N33/68 ,  A61K35/74 ,  A61K38/16 ,  A61P31/04 ,  A23L33/135 ,  A23L33/18 ,  C12R1/19 ,  C12R1/46

摘要： 本发明公开了一种合成乳链菌肽Nisin的异源表达体系及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌采用pRSFDuet‑1载体过表达了乳酸链球菌素前体肽nisA和修饰蛋白nisB，同时采用pACYCDuet‑1载体过表达了修饰蛋白nisC。本发明提供了一种Nisin在大肠杆菌异源表达的方法，该方法利用大肠杆菌自身对Nisin的抗性，实现了Nisin的组成型表达，从而脱离了宿主代谢和基因表达的双重调节，降低了后期的改在难度，有潜力提高Nisin的产量并降低生产成本，为开发新型Nisin高水平合成系统提供了可行方案。

公开(公告)号：CN114107309A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111391569.1

申请日：2021-11-19

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  崔文璟 ,  程锦涛 ,  林巧 ,  周丽 ,  刘中美 ,  郭军玲 ,  刘续

IPC分类号： C12N15/115 ,  C12N15/75 ,  C12N15/67 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。

公开(公告)号：CN114107270A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111485153.6

申请日：2021-12-07

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  刘中美 ,  郝明珠 ,  朱小青 ,  崔睿智 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体E88R的比酶活相对野生型提高了2.1倍，比酶活达481±3.7U/mg。突变体E88R在50℃处理30分钟仍有59％残留酶活性，在pH 7.0和pH 8.0条件下，残余酶活分别为88％和82％。相比野生型酶，该突变体酶E88R的热稳定性与pH稳定性都有很大的提高，有利于以后的工业生产。在pH 7.5条件下，突变体E88R比酶活达到199±2.1U/mg，比野生型高1.9倍。以2.5M马来酸作为底物，全细胞催化制备L‑丙氨酸，生产速率达35.66g/(L·h)，比野生型提高1.68倍。

公开(公告)号：CN113846040A

公开(公告)日：2021-12-28

申请号：CN202111060419.2

申请日：2021-09-10

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  赵凯阳 ,  黄微煜 ,  蔡宋佳 ,  陈员庆 ,  吴超城 ,  周丽 ,  程中一 ,  崔文璟 ,  刘中美

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了协同两类腈水合酶高效催化烟酰胺及丙烯酰胺生物合成的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种基因工程菌，兼具高分子量腈水合酶对腈类物质和酰胺类物质有较高的耐受性，和，低分子量腈水合酶相仿的反应速率，能够高效生产烟酰胺及丙烯酰胺。本发明通过全细胞催化法，以烟腈及丙烯腈为底物，添加终浓度OD600值为8的基因工程菌，催化生成附加值更高的烟酰胺及丙烯酰胺，烟酰胺产量可达375～516g/L，丙烯酰胺产量达到240.8g/L。