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公开(公告)号:CN117660421A
公开(公告)日:2024-03-08
申请号:CN202311564155.3
申请日:2023-11-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了共进化位点改造提高热稳定性和活性的纳豆激酶突变体,属于蛋白质工程技术领域。本发明筛选得到4个活性或稳定性提升的双点突变体,且这四个突变位于2个共进化残基对上。对双点突变进行组合,获得稳定性和活性进一步提升的三个四点组合突变。其中,M5的比酶活为17.9U/mg;其热稳定性大幅提高,55℃下半衰期是野生型的3.5倍,达到718分钟。将M5与之前获得的高性能突变体M4进一步组合,获得突变体M6,其活性和热稳定性得到进一步提升,以为底物时,比酶活达到33.8U/mg,Tm达到73.4±0.5℃,55℃下半衰期达到6348min。
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公开(公告)号:CN114317502B
公开(公告)日:2023-08-25
申请号:CN202111478383.X
申请日:2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的纳豆激酶突变体,属于蛋白质工程领域。本发明筛选得到三种纳豆激酶突变体,分别是突变体M2(S62AN181DY217KN218SN259P),突变体M3(P57CA92C)以及突变体M4(S62AP57CA92CN181DY217KN218SN259P)。其中突变体M4在55℃与65℃下半衰期分别较野生型提升了20.7倍与12.9倍,这是目前已有的报道中关于纳豆激酶热稳定性最优的突变体,同时比酶活也较野生型提升了2.1倍。本发明实现了在提升纳豆激酶热稳定性的同时保持其催化活性,以突破“稳定性活性的权衡”,为纳豆激酶工业化应用奠定了基础。
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公开(公告)号:CN114317502A
公开(公告)日:2022-04-12
申请号:CN202111478383.X
申请日:2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的纳豆激酶突变体,属于蛋白质工程领域。本发明筛选得到三种纳豆激酶突变体,分别是突变体M2(S62AN181DY217KN218SN259P),突变体M3(P57CA92C)以及突变体M4(S62AP57CA92CN181DY217KN218SN259P)。其中突变体M4在55℃与65℃下半衰期分别较野生型提升了20.7倍与12.9倍,这是目前已有的报道中关于纳豆激酶热稳定性最优的突变体,同时比酶活也较野生型提升了2.1倍。本发明实现了在提升纳豆激酶热稳定性的同时保持其催化活性,以突破“稳定性活性的权衡”,为纳豆激酶工业化应用奠定了基础。
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