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公开(公告)号：CN103184210B
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201310069190.8
申请日：2013-03-05
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司 , 山东昆达生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及通过基因工程改造得到的真菌腈水解酶。本发明所述的一种定点突变改造的基因工程腈水解酶，其特征在于所述定点突变的基因工程腈水解酶氨基酸序列相对于天然的真菌腈水解酶氨基酸序列的第144位Glu被敲除。本发明还公开了所述的基因工程腈水解酶的生产方法及其在烟酸合成中的应用。本发明所述的基因工程腈水解酶在催化活力方面更加优良，副产物酰胺的生成能力明显降低，为其在烟酸合成中的大规模、低成本的工业应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104130998B
公开(公告)日：2020-08-25
申请号：CN201410244226.6
申请日：2014-06-05
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异Vc钠有限公司
摘要： 本发明提供了一种高酶活腈水解酶突变株及其制备方法，属于基因工程领域。本发明以恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida CGMCC3830）腈水解酶作为模板，再用分子生物学手段对恶臭假单胞菌腈水解酶序列进行饱和定点突变，获得两株酶活提高的阳性转化子Asn40Gly和Phe50Trp，在此基础上进行组合突变，获得组合突变和株Asn40Gly‑Phe50Trp。在改造条件下，发现酶活均有所提高，并且热稳定性也有所改善。利用此策略可以大大提高腈水解酶的转化能力，使其应用于医药中间体、食品添加剂以及环境治理方面具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102936590B
公开(公告)日：2014-04-16
申请号：CN201210433096.1
申请日：2012-11-05
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
摘要： 本发明涉及一种新型腈水解酶及其基因的克隆和表达。从恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）XY4（编号CGMCC 3830）的总DNA获得腈水解酶基因SEQIDNO:1，该基因全长1113个核苷酸，编码370个氨基酸SEQIDNO:2。本发明还公开了重组腈水解酶的构建、高效表达和纯化的方法，以及纯化重组腈水解酶的最适作用温度和pH。以质粒pET28a(+)为表达载体，以E.coli Rosetta-gami(DE3)为表达宿主，实现腈水解酶基因的高效表达。重组腈水解酶最适作用温度为55℃，最适作用pH为7.5，能高效转化3-氰基吡啶为烟酸，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104130998A
公开(公告)日：2014-11-05
申请号：CN201410244226.6
申请日：2014-06-05
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异Vc钠有限公司
CPC分类号： C12N9/78 , C12Y305/05001
摘要： 本发明提供了一种高酶活腈水解酶突变株及其制备方法，属于基因工程领域。本发明以恶臭假单胞菌（PseudomonasputidaCGMCC3830）腈水解酶作为模板，再用分子生物学手段对恶臭假单胞菌腈水解酶序列进行饱和定点突变，获得两株酶活提高的阳性转化子Asn40Gly和Phe50Trp，在此基础上进行组合突变，获得组合突变和株Asn40Gly-Phe50Trp。在改造条件下，发现酶活均有所提高，并且热稳定性也有所改善。利用此策略可以大大提高腈水解酶的转化能力，使其应用于医药中间体、食品添加剂以及环境治理方面具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102337233B
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201110116234.9
申请日：2011-05-06
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
摘要： 公开了一株新菌株恶臭假单胞菌CGMCC3830(Pseudomonasputida)及应用该菌株催化生产烟酸、异烟酸的方法。本发明以3-氰基吡啶、4-氰基吡啶为原料，以发酵培养获得的具有高腈水解酶活性的恶臭假单胞菌CGMCC3830(Pseudomonasputida)为催化剂进行水解反应，得到产物烟酸、异烟酸。采用流加的方式加入底物于反应器中,反应6-10h，可得到147g/L-221g/L的烟酸或异烟酸。恶臭假单胞菌CGMCC3830(Pseudomonasputida)具有生长周期短、生命力强、转化效率高、转化周期短等特点，能大大降低了烟酸、异烟酸的生产成本；本工艺具有反应条件温和、能耗低、产率高、环境友好等特点。
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公开(公告)号：CN103184210A
公开(公告)日：2013-07-03
申请号：CN201310069190.8
申请日：2013-03-05
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
摘要： 本发明涉及通过基因工程改造得到的真菌腈水解酶。本发明所述的一种定点突变改造的基因工程腈水解酶，其特征在于所述定点突变的基因工程腈水解酶氨基酸序列相对于天然的真菌腈水解酶氨基酸序列的第144位Glu被敲除。本发明还公开了所述的基因工程腈水解酶的生产方法及其在烟酸合成中的应用。本发明所述的基因工程腈水解酶在催化活力方面更加优良，副产物酰胺的生成能力明显降低，为其在烟酸合成中的大规模、低成本的工业应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103103228A
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN201310063189.4
申请日：2013-02-28
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术应用领域，具体涉及一种将产腈水解酶的赤霉菌CA3-1（CGMCC No. 4903）用壳聚糖-聚乙烯醇复合材料固定化并用于制备烟酸的方法。具体是将赤霉菌CA3-1固定化，加入适量的3-氰基吡啶，选择固定化细胞的最适反应条件，得到产物烟酸。研究发现，壳聚糖-聚乙烯醇固定化细胞的转化活力比聚乙烯醇小球高，重复利用性也优于壳聚糖固定化小球。这种固定化细胞可以重复利用多次，具有较高的底物耐受性，能够提高单位菌体的生产能力。为生物转化法制备烟酸提供了前提，为赤霉菌CA3-1（CGMCC No. 4903）在由3-氰基吡啶制备烟酸的工业化应用做好铺垫。
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公开(公告)号：CN103060397B
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201210538372.0
申请日：2012-12-13
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术应用领域，具体涉及一种赤霉菌CA3-1（Gibberella intermedia），保藏号CGMCC No. 4903固定化并应用于生物转化制备烟酸的方法。具体是将赤霉菌CA3-1固定化，加入适量的3-氰基吡啶，选择固定化菌体的最适反应条件，得到产物烟酸。菌体经固定化后增强了菌体对底物的耐受性，提高了单位菌体的生产能力，并大大简化了产物的分离过程，重复利用次数显著增多，为利用赤霉菌进行生物转化法制备烟酸的工艺实现提供了基础。
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公开(公告)号：CN103667228B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201310678943.5
申请日：2013-12-14
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异Vc钠有限公司
IPC分类号： C12N9/78 , C12N15/55 , C12N15/70 , A23L33/195
摘要： 本发明提供一种催化活力和热稳定性提高的真菌腈水解酶突变体及其构建方法，该突变体是由赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3?1真菌腈水解酶基因出发，运用多轮定点饱和突变构建突变体库而筛选获得。本发明采用半理性设计的方法获取真菌腈水解酶突变体，其特征在于对真菌腈水解酶活性中心附近第128位Ile和第161位Asn进行了改造，获得的突变体分别为Ile128Leu、Asn161Gln以及Ile128Leu?Asn161Gln。本发明提供的突变体催化活力和热稳定性均得到了显著提高，改造后的真菌腈水解酶突变体可降低生产成本，提高生产效率，具有更高的应用价值。
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公开(公告)号：CN103103228B
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201310063189.4
申请日：2013-02-28
申请人： 江南大学 , 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术应用领域，具体涉及一种将产腈水解酶的赤霉菌CA3-1（CGMCC No. 4903）用壳聚糖-聚乙烯醇复合材料固定化并用于制备烟酸的方法。具体是将赤霉菌CA3-1固定化，加入适量的3-氰基吡啶，选择固定化细胞的最适反应条件，得到产物烟酸。研究发现，壳聚糖-聚乙烯醇固定化细胞的转化活力比聚乙烯醇小球高，重复利用性也优于壳聚糖固定化小球。这种固定化细胞可以重复利用多次，具有较高的底物耐受性，能够提高单位菌体的生产能力。为生物转化法制备烟酸提供了前提，为赤霉菌CA3-1（CGMCC No. 4903）在由3-氰基吡啶制备烟酸的工业化应用做好铺垫。
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