公开(公告)号：CN112176040A

公开(公告)日：2021-01-05

申请号：CN202011002396.5

申请日：2020-09-22

申请人： 江苏省海洋资源开发研究院(连云港) ,  江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 卢辰 ,  罗志丹 ,  陈晓雨 ,  张坤晓 ,  许恒皓 ,  唐雨婷 ,  陈佳玥

IPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/48 ,  G01N21/64

摘要： 本发明公开一种快速测定DNA聚合酶活性的方法，包括：(1)绘制标准曲线并计算线性回归方程：将两种寡核苷酸探针H1和H2以不同比例混合，测量荧光值并绘制标准曲线，计算线性回归方程；(2)恒温条件下进行DNA聚合酶活性检测反应：以步骤(1)中仅含H1的工作溶液为底物，加入dNTP混合液和镁离子，使用该DNA聚合酶对应的反应缓冲液，配制DNA聚合酶活性检测反应体系；(3)中止反应后测定产物荧光值：恒温反应后强行中止反应，降温到室温后测定产物含量，记录30min下的荧光增加值；(4)计算酶活性：将荧光增加值代入步骤(1)中得到的标准曲线对应的线性回归方程，得出体系中产物的含量，计算原酶液活性。不依赖同位素，操作简单，准确度和重复性好。

公开(公告)号：CN113186340A

公开(公告)日：2021-07-30

申请号：CN202110229652.2

申请日：2021-03-02

申请人： 江苏海洋大学 ,  江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 罗志丹 ,  许恒皓 ,  张新亚 ,  张建 ,  陈晓雨 ,  卢辰

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一组快速检测碎片化新冠病毒S基因点突变的引物及应用，包括引物组：一组LDR引物LDR‑1、LDR‑2和一组PCR引物LDR‑UF、LDR‑UR，各条引物均为单链DNA分子；本发明将连接酶检测反应与聚合酶链式反应联用，可以检测长度低至40nt、高度降解的碎片化RNA中所含有的点突变，而现有逆转录‑荧光定量PCR技术只能检测长度在100nt以上的RNA模板。

公开(公告)号：CN112143723A

公开(公告)日：2020-12-29

申请号：CN202010994643.8

申请日：2020-09-21

申请人： 江苏海洋大学 ,  江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 唐雨婷 ,  许恒皓 ,  罗志丹 ,  陈晓雨 ,  胡文灏 ,  郦娟

IPC分类号： C12N9/12 ,  C07K19/00 ,  C07K16/40 ,  C12Q1/686

摘要： 本发明公开一种热启动Tth DNA聚合酶及其制备方法，所述的热启动Tth DNA聚合酶指Tth DNA聚合酶与Tth单克隆抗体经过抗原抗体反应而结合形成的抗原抗体复合物，从而达到封闭Tth DNA聚合酶活性的目的。包括以下步骤：获得Tth DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶单克隆抗体；将上述组分按照一定比例混合：所述Tth DNA聚合酶与Tth DNA聚合酶单克隆抗体的摩尔比为1:3‑1:10。所述的Tth DNA聚合酶单克隆抗体的来源包括但不限于通过Tth DNA聚合酶免疫可产生单克隆抗体的动物得到。本发明还涉及由以上方法制备的热启动Tth DNA聚合酶的应用。本发明制备的热启动Tth DNA聚合酶能够很大程度上解决引物错配或二聚体，降低非特异产物的生成，大大提高了特异性和扩增效率，适用于各类PCR扩增。