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    一种快速测定DNA聚合酶活性的方法
    1.
    发明公开
    一种快速测定DNA聚合酶活性的方法 审中-实审 质押

    公开(公告)号：CN112176040A

    公开(公告)日：2021-01-05

    申请号：CN202011002396.5

    申请日：2020-09-22

    申请人： 江苏省海洋资源开发研究院(连云港) ,  江苏愚公生命科技有限公司

    发明人： 卢辰 ,  罗志丹 ,  陈晓雨 ,  张坤晓 ,  许恒皓 ,  唐雨婷 ,  陈佳玥

    IPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/48 ,  G01N21/64

    摘要： 本发明公开一种快速测定DNA聚合酶活性的方法，包括：(1)绘制标准曲线并计算线性回归方程：将两种寡核苷酸探针H1和H2以不同比例混合，测量荧光值并绘制标准曲线，计算线性回归方程；(2)恒温条件下进行DNA聚合酶活性检测反应：以步骤(1)中仅含H1的工作溶液为底物，加入dNTP混合液和镁离子，使用该DNA聚合酶对应的反应缓冲液，配制DNA聚合酶活性检测反应体系；(3)中止反应后测定产物荧光值：恒温反应后强行中止反应，降温到室温后测定产物含量，记录30min下的荧光增加值；(4)计算酶活性：将荧光增加值代入步骤(1)中得到的标准曲线对应的线性回归方程，得出体系中产物的含量，计算原酶液活性。不依赖同位素，操作简单，准确度和重复性好。

    一种快速检测灰花纹鹅膏DNA的试剂盒及其应用
    3.
    发明公开
    一种快速检测灰花纹鹅膏DNA的试剂盒及其应用 审中-实审

    公开(公告)号：CN117683932A

    公开(公告)日：2024-03-12

    申请号：CN202311805214.1

    申请日：2023-12-26

    申请人： 江苏省海洋资源开发研究院(连云港)

    发明人： 王国春 ,  卢辰 ,  罗志丹 ,  许恒皓

    IPC分类号： C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

    摘要： 本发明公开了一种快速检测灰花纹鹅膏DNA的试剂盒及其应用，所述试剂盒包括Bst DNA聚合酶、Cas12b核酸酶、热敏尿嘧啶DNA糖苷酶、RNA酶抑制剂、引物组、用于CRISPR/Cas12b反应的sgRNA、dNTP(含dUTP)、MgSO4、反应缓冲液、单链寡核苷酸探针、以及胶体金侧向流试纸条。本发明提供了用于LAMP扩增灰花纹鹅膏DNA的特异性引物组和CRISPR/Cas12b检测的sgRNA，能够快速鉴定灰花毒鹅膏，灵敏度高、特异性好、无需昂贵仪器，仅在30min内就可以快速区分出灰花纹鹅膏和其他鹅膏菌，结果判读简单准确，适合基层检测使用。

    一组快速检测新冠病毒S基因点突变的核酸探针及方法
    6.
    发明公开
    一组快速检测新冠病毒S基因点突变的核酸探针及方法 审中-实审

    公开(公告)号：CN115094163A

    公开(公告)日：2022-09-23

    申请号：CN202210542888.6

    申请日：2022-05-18

    申请人： 江苏省海洋资源开发研究院(连云港)

    发明人： 罗志丹 ,  许恒皓 ,  王欣竹 ,  张新亚 ,  卢辰 ,  张建 ,  吴芳

    IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

    摘要： 本发明公开了一组快速检测新冠病毒S基因点突变的核酸探针及方法，包括检测新冠病毒S基因N679K突变的锁式探针PLP‑1，超分支滚环扩增引物组RCA‑F和RCA‑R以及检测扩增产物所用sgRNA，所述检测新冠病毒S基因N679K突变的锁式探针PLP‑1，超分支滚环扩增引物组RCA‑F和RCA‑R均为单链DNA；所述锁式探针PLP‑1的核苷酸碱基序列为SEQIDNo.1所示，其中5’端具备磷酸化修饰；所述超分支滚环扩增引物组包含2条引物，核苷酸碱基序列分别为为SEQIDNo.2和SEQIDNo.3。本发明将锁式探针、超分支滚环扩增反应和CRISPR/Cas12技术联用，可以检测长度低至50nt、高度降解的碎片化病毒RNA中所含有的点突变，操作简单，灵敏度高，反应时间短。

    一种热启动Tth DNA聚合酶及其制备方法
    8.
    发明公开
    一种热启动Tth DNA聚合酶及其制备方法 审中-实审

    公开(公告)号：CN112143723A

    公开(公告)日：2020-12-29

    申请号：CN202010994643.8

    申请日：2020-09-21

    申请人： 江苏海洋大学 ,  江苏愚公生命科技有限公司

    发明人： 唐雨婷 ,  许恒皓 ,  罗志丹 ,  陈晓雨 ,  胡文灏 ,  郦娟

    IPC分类号： C12N9/12 ,  C07K19/00 ,  C07K16/40 ,  C12Q1/686

    摘要： 本发明公开一种热启动Tth DNA聚合酶及其制备方法，所述的热启动Tth DNA聚合酶指Tth DNA聚合酶与Tth单克隆抗体经过抗原抗体反应而结合形成的抗原抗体复合物，从而达到封闭Tth DNA聚合酶活性的目的。包括以下步骤：获得Tth DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶单克隆抗体；将上述组分按照一定比例混合：所述Tth DNA聚合酶与Tth DNA聚合酶单克隆抗体的摩尔比为1:3‑1:10。所述的Tth DNA聚合酶单克隆抗体的来源包括但不限于通过Tth DNA聚合酶免疫可产生单克隆抗体的动物得到。本发明还涉及由以上方法制备的热启动Tth DNA聚合酶的应用。本发明制备的热启动Tth DNA聚合酶能够很大程度上解决引物错配或二聚体，降低非特异产物的生成，大大提高了特异性和扩增效率，适用于各类PCR扩增。

    一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法
    9.
    发明公开
    一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法 无效

    公开(公告)号：CN106906237A

    公开(公告)日：2017-06-30

    申请号：CN201710253825.8

    申请日：2017-04-18

    申请人： 淮海工学院 ,  江苏愚公生命科技有限公司

    发明人： 李京 ,  高嵩 ,  陈祉月 ,  罗志丹 ,  龚雪梅 ,  张惠铭 ,  张羽 ,  潘绮雯

    IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N9/12

    CPC分类号： C12N15/70 ,  C12N9/1276 ,  C12Y207/07049

    摘要： 本发明是一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法，包括突变体克隆构建，所构建的突变体质粒序列均经过测序确认，得到17个突变体质粒；然后进行突变体的筛选：将野生型pET28b‑M‑MLV和17个突变体质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞中，培养、诱导突变酶表达；收集菌体获得突变酶粗提液；选择有蛋白表达的突变酶粗提液，在不同温度下进行逆转录活性筛选：将活性筛选结果阳性的突变体在液体培养基中培养、诱导蛋白表达；收集菌体纯化得到M‑MLV逆转录酶。本发明方法采用分子理性设计与功能筛选相结合，在较小范围内筛选即获得高热稳定性M‑MLV逆转录酶，其热稳定性达到耐热能力65°C。