公开(公告)号：CN105483291B

公开(公告)日：2018-11-23

申请号：CN201511021732.X

申请日：2015-12-31

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 胡慧 ,  曹贝贝 ,  张君涛 ,  郑兰兰 ,  魏战勇 ,  梁秀丽 ,  周雍

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR检测引物。本发明多重RT‑PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT‑PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。

公开(公告)号：CN105483291A

公开(公告)日：2016-04-13

申请号：CN201511021732.X

申请日：2015-12-31

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 胡慧 ,  曹贝贝 ,  张君涛 ,  郑兰兰 ,  魏战勇 ,  梁秀丽 ,  周雍

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/09

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2600/16 ,  C12Q2537/143 ,  C12Q2521/107

Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR检测引物。本发明多重RT-PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT-PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。

公开(公告)号：CN105400910B

公开(公告)日：2018-09-21

申请号：CN201511025198.X

申请日：2015-12-31

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 胡慧 ,  梁秀丽 ,  曹贝贝 ,  王亚宾 ,  魏战勇 ,  张君涛 ,  刘芳 ,  刘玲玲

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种病毒的检测方法，具体涉及一种猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR检测引物及检测方法。本发明利用引物检测猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR的方法，该方法不用于疾病的诊断和治疗，包括提取病毒的DNA后，按多重荧光定量RT‑PCR反应体系和反应条件对病毒进行检测，本发明的57份临床样品的多重RT‑PCR检测结果显示，同时感染这2种病毒的阳性率为1.75％，感染PDCoV阳性率为19.30％，感染TGEV阳性率为1.75％。结果表明，建立多重RT‑PCR方法能够对PDCoV和TGEV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

公开(公告)号：CN105483290A

公开(公告)日：2016-04-13

申请号：CN201511018859.6

申请日：2015-12-31

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 胡慧 ,  郑兰兰 ,  梁秀丽 ,  魏战勇 ,  张君涛 ,  曹贝贝 ,  张利卫

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2600/16 ,  C12Q2537/143

Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测引物，猪德尔塔冠状病毒的引物序列如下：上游引物：5＇- TTAGTCGGGTCCTTTGCG -3＇，下游引物：5＇- ACTCTCGTTGAAAGTCCG-3＇，扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段260 bp。本发明根据GenBank中登录的PDCoV（KJ567050.1）Illinois121株的N基因序列的保守区设计一对特异性引物，经过对反应条件进行优化，建立了检测PDCoV的SYBRGreen 荧光定量PCR方法。该方法对常见的病毒均检测不到荧光信号，仅对PDCoV检测为阳性，其灵敏度为54拷贝/μL；组内和组间变异系数均小于1%。本试验建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可用于临床PDCoV的检测。

公开(公告)号：CN105400910A

公开(公告)日：2016-03-16

申请号：CN201511025198.X

申请日：2015-12-31

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 胡慧 ,  梁秀丽 ,  曹贝贝 ,  王亚宾 ,  魏战勇 ,  张君涛 ,  刘芳 ,  刘玲玲

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: Y02A50/451 ,  C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2600/16 ,  C12Q2537/143

Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR检测引物：猪德尔塔冠状病毒的引物序列如下：上游引物P1：5＇- ATGGCTACTGGCTGCGTTAC-3＇下游引物P2：5＇- GCGTTTCCTGGGCTGATT-3＇扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段383 bp；猪传染性胃肠炎病毒的引物序列如下：上游引物P3：5＇- CCCTCCAGCAAGGTTCAA-3＇下游引物P4：5＇- GCAACCCAGACAACTCCA-3＇扩增猪传染性胃肠炎病毒基因部分片段229 bp。本发明多重RT-PCR对PDCoV和TGEV的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL和5.47×102拷贝/μL，而对猪流行性腹泻病毒，博卡病毒，猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪轮状病毒的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT-PCR检测结果显示，同时感染这2种病毒的阳性率为1.75%，感染PDCoV阳性率为19.30%，感染TGEV阳性率为1.75%。