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公开(公告)号：CN107190022B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201710507429.3
申请日：2017-06-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种快速构建禽传染性支气管炎病毒反向遗传株的方法，属于冠状病毒反向遗传技术领域。所述构建方法包括：以BAC载体为骨架，运用体外同源重组技术，快速完成包含禽传染性支气管炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建，将构建的重组质粒直接转染细胞，在细胞内转录获得具有感染性的转录本，并完成病毒包装，将细胞与培养基的混合液接种SPF鸡胚并传代，获得禽传染性支气管炎病毒反向遗传株。该构建方法操作简单，阳性克隆率高，而且获得的反向遗传株具有传代稳定性，为体外研究病毒的致病机理、开发新型疫苗等提供了有效的工具；本发明利用5’添加的CMV启动子，在细胞内进行转录，利用3’添加的HDVR序列，大大提高了病毒的拯救效率。
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公开(公告)号：CN108950068B
公开(公告)日：2021-05-07
申请号：CN201810788384.6
申请日：2018-07-18
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒QX型毒株鉴别检测试剂盒。该试剂盒包括两对引物，分别是用于扩增传染性支气管炎病毒的通用引物和用于特异性扩增QX基因型毒株的引物；其中，用于特异性扩增QX基因型毒株的引物的序列如如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。本发明通过设计QX基因型的特异性引物建立有效的RT‑PCR检测方法，仅需通过一次RT‑PCR反应就能达到对QX基因型的IBV进行分型检测的目的。该试剂盒在同一PCR反应条件下，将2对引物加入同一个PCR体系中，既能有效地检测出临床样品或鸡胚尿囊液中的IBV，也能特异性地将QX型基因型的IBV区分出来。该检测方法快速高效、准确，对于指导疫苗的选用以及IB的快速防控都具有很大的意义。
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公开(公告)号：CN108950068A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810788384.6
申请日：2018-07-18
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2565/125 , C12Q2521/107
Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒QX型毒株鉴别检测试剂盒。该试剂盒包括两对引物，分别是用于扩增传染性支气管炎病毒的通用引物和用于特异性扩增QX基因型毒株的引物；其中，用于特异性扩增QX基因型毒株的引物的序列如如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。本发明通过设计QX基因型的特异性引物建立有效的RT‑PCR检测方法，仅需通过一次RT‑PCR反应就能达到对QX基因型的IBV进行分型检测的目的。该试剂盒在同一PCR反应条件下，将2对引物加入同一个PCR体系中，既能有效地检测出临床样品或鸡胚尿囊液中的IBV，也能特异性地将QX型基因型的IBV区分出来。该检测方法快速高效、准确，对于指导疫苗的选用以及IB的快速防控都具有很大的意义。
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公开(公告)号：CN107190022A
公开(公告)日：2017-09-22
申请号：CN201710507429.3
申请日：2017-06-28
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12N15/85 , C12N7/00 , C12N2770/20021 , C12N2770/20052 , C12N2800/204
Abstract: 本发明公开了一种快速构建禽传染性支气管炎病毒反向遗传株的方法，属于冠状病毒反向遗传技术领域。所述构建方法包括：以BAC载体为骨架，运用体外同源重组技术，快速完成包含禽传染性支气管炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建，将构建的重组质粒直接转染细胞，在细胞内转录获得具有感染性的转录本，并完成病毒包装，将细胞与培养基的混合液接种SPF鸡胚并传代，获得禽传染性支气管炎病毒反向遗传株。该构建方法操作简单，阳性克隆率高，而且获得的反向遗传株具有传代稳定性，为体外研究病毒的致病机理、开发新型疫苗等提供了有效的工具；本发明利用5’添加的CMV启动子，在细胞内进行转录，利用3’添加的HDVR序列，大大提高了病毒的拯救效率。
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