公开(公告)号：CN105277493B

公开(公告)日：2018-05-01

申请号：CN201510613269.1

申请日：2015-09-23

申请人： 浙江大学宁波理工学院

发明人： 金志华 ,  吴志革 ,  金庆超 ,  杨郁 ,  蔡伟 ,  张鑫红 ,  戎凯 ,  罗伊丝

IPC分类号： G01N21/31

摘要： 本发明公开了一种检测DERA酶催化连续醛缩反应液中氯乙醛含量及催化效率的方法，检测反应液中氯乙醛含量的方法包括：(1)取反应上清液，加入2，4‑二硝基苯肼，在酸性条件下进行反应，获得样本反应液；(2)向样本反应液中加入碱液继续反应，获得样本待测液；(3)在520～535nm波长下测量样本待测液的吸光度，根据标准曲线计算反应上清液中氯乙醛的含量。然后根据计算参与催化反应的氯乙醛的消耗量来反映DERA酶的催化效率。在528nm下测量样本待测液的吸光度，在该波长下只有氯乙醛参与产生的产物的吸收峰，不存在乙醛参与产生的产物的干扰，测量结果稳定、其准确率和灵敏度均大大提高。

公开(公告)号：CN104293757B

公开(公告)日：2016-11-30

申请号：CN201410521149.4

申请日：2014-09-30

申请人： 浙江大学宁波理工学院

发明人： 金志华 ,  吴志革 ,  金庆超 ,  杨郁 ,  蔡伟 ,  张鑫红 ,  戎凯

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种醛缩酶及其编码基因和应用。醛缩酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码基因的碱基序列如SEQ ID No.2所示。所述应用是该醛缩酶在生产他汀类药物中间体中的应用。本发明在嗜热菌野生型醛缩酶的基础上，对其编码基因进行随机突变叠加定点突变，获得双突变基因，该双突变基因表达的醛缩酶不仅保有了野生型醛缩酶的抗底物变性能力，其催化活性也大大提高；利用该酶催化乙醛和氯乙醛发生羟醛缩合反应，其催化效率比野生型醛缩酶提高了3倍；表明本发明的醛缩酶具有良好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN104371935B

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201410570517.4

申请日：2014-10-23

申请人： 浙江大学宁波理工学院

发明人： 金志华 ,  金庆超 ,  吴志革 ,  杨郁 ,  王爱珂 ,  庄庆察 ,  黄俊淇 ,  蔡伟 ,  戎凯

IPC分类号： C12N1/16 ,  C12P13/00 ,  C12R1/645

摘要： 本发明提供一种博伊丁假丝酵母，它的保藏编号为CGMCC9446，完整命名为博伊丁假丝酵母T1。本发明还进一步提供该博伊丁假丝酵母T1在催化合成阿托伐他汀中间体中的应用，具体为以6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基已酸叔丁酯为底物、催化合成6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯，该博伊丁假丝酵母可以表达高立体选择性的羰基还原酶，使6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基已酸叔丁酯的转化率达到99％，产物6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯的d.e.值达到100％。

公开(公告)号：CN104371935A

公开(公告)日：2015-02-25

申请号：CN201410570517.4

申请日：2014-10-23

申请人： 浙江大学宁波理工学院

发明人： 金志华 ,  金庆超 ,  吴志革 ,  杨郁 ,  王爱珂 ,  庄庆察 ,  黄俊淇 ,  蔡伟 ,  戎凯

IPC分类号： C12N1/16 ,  C12P13/00 ,  C12R1/645

CPC分类号： C12N1/16 ,  C12P13/002 ,  C12R1/645

摘要： 本发明提供一种博伊丁假丝酵母，它的保藏编号为CGMCC9446，完整命名为博伊丁假丝酵母T1。本发明还进一步提供该博伊丁假丝酵母T1在催化合成阿托伐他汀中间体中的应用，具体为以6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基已酸叔丁酯为底物、催化合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯，该博伊丁假丝酵母可以表达高立体选择性的羰基还原酶，使6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基已酸叔丁酯的转化率达到99％，产物6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的d.e.值达到100％。

公开(公告)号：CN104293757A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410521149.4

申请日：2014-09-30

申请人： 浙江大学宁波理工学院

发明人： 金志华 ,  吴志革 ,  金庆超 ,  杨郁 ,  蔡伟 ,  张鑫红 ,  戎凯

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P17/06 ,  C12Y401/02004

摘要： 本发明公开了一种醛缩酶及其编码基因和应用。醛缩酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码基因的碱基序列如SEQ ID No.2所示。所述应用是该醛缩酶在生产他汀类药物中间体中的应用。本发明在嗜热菌野生型醛缩酶的基础上，对其编码基因进行随机突变叠加定点突变，获得双突变基因，该双突变基因表达的醛缩酶不仅保有了野生型醛缩酶的抗底物变性能力，其催化活性也大大提高；利用该酶催化乙醛和氯乙醛发生羟醛缩合反应，其催化效率比野生型醛缩酶提高了3倍；表明本发明的醛缩酶具有良好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN105277493A

公开(公告)日：2016-01-27

申请号：CN201510613269.1

申请日：2015-09-23

申请人： 浙江大学宁波理工学院

发明人： 金志华 ,  吴志革 ,  金庆超 ,  杨郁 ,  蔡伟 ,  张鑫红 ,  戎凯 ,  罗伊丝

IPC分类号： G01N21/31

摘要： 本发明公开了一种检测DERA酶催化连续醛缩反应液中氯乙醛含量及催化效率的方法，检测反应液中氯乙醛含量的方法包括：(1)取反应上清液，加入2，4-二硝基苯肼，在酸性条件下进行反应，获得样本反应液；(2)向样本反应液中加入碱液继续反应，获得样本待测液；(3)在520～535nm波长下测量样本待测液的吸光度，根据标准曲线计算反应上清液中氯乙醛的含量。然后根据计算参与催化反应的氯乙醛的消耗量来反映DERA酶的催化效率。在528nm下测量样本待测液的吸光度，在该波长下只有氯乙醛参与产生的产物的吸收峰，不存在乙醛参与产生的产物的干扰，测量结果稳定、其准确率和灵敏度均大大提高。