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公开(公告)号：CN119060972A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411364935.8
申请日：2024-09-27
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了羟化酶及其催化应用方法。在本发明中，通过基因比对检索数据库，得到多种生物来源的cis‑4‑脯氨酸羟化酶；建立了一种cis‑4‑脯氨酸羟化酶比酶活测定方法，并对筛选得到的cis‑4‑脯氨酸羟化酶进行多水平的横向比较，最终得到了能高效异源表达的高性能cis‑4‑脯氨酸羟化酶。同时构建了cis‑L‑5‑羟基‑哌啶‑2‑甲酸的检测方法和酶催化合成体系，合成方法反应条件温和、原料利用率高且绿色环保，具有一定的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN114807099B
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202210272672.2
申请日：2022-03-18
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N9/44 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K1/14 , C07K1/22 , C07K1/34 , C07K1/36 , C12P19/14 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用，所述普鲁兰酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第365位、第401位、第504位或第499位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明构建的普鲁兰酶突变体的催化活性、热稳定性与耐酸稳定性均得到了提高，其中突变体PulAR‑A365V‑401C‑H499A‑T504V的催化效率较野生型普鲁兰酶PulAR在pH5.0、6.0，60℃条件下分别提高了6.6倍与9.6倍；在60℃，65℃的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了2.6和3.1倍，且在pH 4.5与pH 5.0的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了1.6和1.8倍。
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公开(公告)号：CN114807099A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210272672.2
申请日：2022-03-18
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N9/44 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K1/14 , C07K1/22 , C07K1/34 , C07K1/36 , C12P19/14 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用，所述普鲁兰酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第365位、第401位、第504位或第499位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明构建的普鲁兰酶突变体的催化活性、热稳定性与耐酸稳定性均得到了提高，其中突变体PulAR‑A365V‑401C‑H499A‑T504V的催化效率较野生型普鲁兰酶PulAR在pH5.0、6.0，60℃条件下分别提高了6.6倍与9.6倍；在60℃，65℃的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了2.6和3.1倍，且在pH 4.5与pH 5.0的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了1.6和1.8倍。
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公开(公告)号：CN118956845A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202411367088.0
申请日：2024-09-27
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种手性医药中间体的酶法合成，包括赖氨酸环化脱氨酶、突变体及生产L‑哌啶‑2‑甲酸的方法。本发明对来源于Streptomyces pristinaespiralis的野生型赖氨酸环化脱氨酶进行定点饱和突变，得到突变体A148M、A148L、A212V和A212R，其酶活分别为野生型赖氨酸环化脱氨酶酶活的188.4％、211.6％、139.6％和165.1％；并以赖氨酸环化脱氨酶或突变体作为生物催化剂，以L‑赖氨酸为主要底物，一步合成L‑哌啶‑2‑甲酸(L‑PA)，此合成方法高产率、高选择性、绿色环保、工艺简单易操作，有利于大规模生产。
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公开(公告)号：CN113621589A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110900178.1
申请日：2021-08-06
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种醛酮还原酶KmAKR突变体、工程菌及其在不对称还原6‑氯‑(5S)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯制备6‑氯‑(3R,5S)‑二羟基己酸叔丁酯中应用，所述醛酮还原酶KmAKR突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第164位、第182位、第232位或第266位进行单突变或多突变获得的。本发明构建的突变体单位菌体酶活较对照组增加了0.24～0.30倍；全细胞下的T5015值则提高了0.6～6.3℃，最大底物投料量可达到400g/L，底物转化率大于99％，dep值始终保持在99.5％以上，时空产率达到449.2g/L/d。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113621589B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202110900178.1
申请日：2021-08-06
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种醛酮还原酶KmAKR突变体、工程菌及其在不对称还原6‑氯‑(5S)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯制备6‑氯‑(3R,5S)‑二羟基己酸叔丁酯中应用，所述醛酮还原酶KmAKR突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第164位、第182位、第232位或第266位进行单突变或多突变获得的。本发明构建的突变体单位菌体酶活较对照组增加了0.24～0.30倍；全细胞下的T5015值则提高了0.6～6.3℃，最大底物投料量可达到400g/L，底物转化率大于99％，dep值始终保持在99.5％以上，时空产率达到449.2g/L/d。
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公开(公告)号：CN112899246B
公开(公告)日：2022-06-21
申请号：CN202110136118.7
申请日：2021-02-01
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种醛酮还原酶KmAKR突变体及其催化合成手性醇的应用，所述醛酮还原酶KmAKR突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第30位、第302位、第109位、第196位、第23位或第213位进行单位点或多位点突变获得的。本发明构建的醛酮还原酶突变体M7和M9的比酶活较出发菌株分别增加了1.1倍和0.63倍，T5015分别提升6.3℃和4.9℃。对于突变体M9，底物6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯投料量可达到350g/L时，3.7h内可反应完成，底物转化率大于99％，产物dep值始终保持在99.5％以上，时空产率达到1.82kg/L·d。
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公开(公告)号：CN110577940B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN201910932502.0
申请日：2019-09-29
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种马克斯克鲁维酵母醛酮还原酶KmAKR的突变体及其应用，所述醛酮还原酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第63位点进行定点饱和突变获得的。本发明构建的醛酮还原酶突变体M5‑A、M5‑L、M5‑M的比酶活较对照组醛酮还原酶分别增加了1.1倍、3.2倍、4.1倍。其中突变体KmAKR‑Y296W/W297H/K29H/Y28A/T63M对6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯、6‑氯‑(5S)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯等具有显著改善的催化活性。最大底物6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯投料量可达到450g/L，底物转化率高于99％，产物dep值始终保持在99.5％以上，生物催化过程的时空产率高达1224.3g/L d。
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公开(公告)号：CN116656656A
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310125922.4
申请日：2023-02-10
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N9/88 , C12N15/60 , C12N1/21 , C12N1/20 , C12N15/70 , C12P13/02 , C12P17/12 , C12R1/39 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体、菌株及在催化芳香族腈类化合物合成酰胺类化合物中的应用，所述腈水合酶PfNH突变体是将SEQ ID NO.9所示腈水合酶PfNH氨基酸序列的第86位进行单突变获得的。本发明腈水合酶PfNH突变体PfNH‑Q86W的底物偏好性发生明显改变，对分子量较大的芳香族腈类如4‑氰基吡啶、苯甲腈、2,6‑二氟苯甲腈的催化性能较野生型显著的提升，对比酶活分别提高2.56倍、9.35倍、2.29倍；而对分子量较小的脂肪族腈类如异丁腈、正戊腈的催化性能较野生型有所降低，比酶活分别是野生型的0.38倍、0.80倍。突变体对芳香族腈类化合物催化活性显著提高，展现出工业应用前景。
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公开(公告)号：CN110577940A
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201910932502.0
申请日：2019-09-29
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种马克斯克鲁维酵母醛酮还原酶KmAKR的突变体及其应用，所述醛酮还原酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第63位点进行定点饱和突变获得的。本发明构建的醛酮还原酶突变体M5-A、M5-L、M5-M的比酶活较对照组醛酮还原酶分别增加了1.1倍、3.2倍、4.1倍。其中突变体KmAKR-Y296W/W297H/K29H/Y28A/T63M对6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯、6-氯-(5S)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯等具有显著改善的催化活性。最大底物6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯投料量可达到450g/L，底物转化率高于99％，产物dep值始终保持在99.5％以上，生物催化过程的时空产率高达1224.3g/L d。
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