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公开(公告)号：CN110577921A
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201910450827.5
申请日：2019-05-28
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是敲除结节链霉菌ZJB2016050(Streptomyces nodosus ZJB2016050)内两性霉素B的竞争支路获得的；通过导入功能基因，使两性霉素B骨架合成前体供给量全面提升，提高菌种对营养物质的利用率，改变目标产物的营养物质流向。通过敲除竞争基因簇提高两性霉素B的产量，可提高两性霉素B产量25％，提高菌种在发酵过程中对培养基营养成分的利用率，缩短发酵周期从而降低染菌风险。
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公开(公告)号：CN107893048A
公开(公告)日：2018-04-10
申请号：CN201710962492.6
申请日：2017-10-17
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1所示卡那霉素抗性基因序列导入结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050获得的；通过导入卡那霉素抗性基因，使原本不具抗性的生产菌株带有卡那霉素抗性，提高种子培养基的菌种纯度和质量，实验室种子培养未出现染菌现象。通过表达功能基因透明颤菌血红蛋白(vhb)，提高AmB产量约15％；通过表达功能基因S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(metk)，提高AmB产量约40％。
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公开(公告)号：CN110564718B
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN201910450165.1
申请日：2019-05-28
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及本发明涉及一种高通量诱变筛选高产两性霉素B结节链霉菌的方法，以及筛选到的诱变株，由诱变株获得的重组工程菌及应用。本发明筛选获得的一株高产两性霉素B结节链霉菌菌株——结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050。本发明的有益效果主要体现在：1、通过高通量筛选高产两性霉素B菌种的方法，能够方便快速高效地检测两性霉素B的产量，提高了诱变育种和基因工程菌株的筛选或验证效率。2、诱变育种获得的结节链霉菌N5，相对原始菌株N3，两性霉素B产量提高了20％，能够作为基因工程菌的原始菌株。3、通过过表达功能基因分别提高两性霉素B的产量，其中乙酰辅酶A羧化酶1(acc1)提高两性霉素B产量20％。4、卡那霉素价格优廉、抗菌谱广、杀菌作用强，适用于工业中使用，对于企业总体收益率有较强提高作用，以实验室5L罐为计算，能降低成本约2000元/罐。
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公开(公告)号：CN107893048B
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201710962492.6
申请日：2017-10-17
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1所示卡那霉素抗性基因序列导入结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050获得的；通过导入卡那霉素抗性基因，使原本不具抗性的生产菌株带有卡那霉素抗性，提高种子培养基的菌种纯度和质量，实验室种子培养未出现染菌现象。通过表达功能基因透明颤菌血红蛋白(vhb)，提高AmB产量约15％；通过表达功能基因S‑腺苷甲硫氨酸合成酶基因(metk)，提高AmB产量约40％。
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公开(公告)号：CN110305926A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910446775.4
申请日：2019-05-27
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种基于两性霉素B代谢途径的发酵方法，所述方法包括：将结节链霉菌接种至发酵培养基，25～30℃、150～250r/min条件下培养96～168h，在发酵培养第12～36h内向发酵液中添加关键差异代谢物质，发酵结束后，发酵产物经分离纯化获得所述的两性霉素B。通过在AMB发酵培养至12～36h添加各种关键差异代谢物，来提高AMB的发酵水平。从本发明实施例中可以看出，发酵培养24h添加丙酮酸可以使AMB的产量由5360mg/L提高至6645mg/L；在培养基中添加D-泛酸钙或烟酰胺可使AMB产量分别提高18.6％和12.5％。
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公开(公告)号：CN108441459A
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201810147126.X
申请日：2018-02-12
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产两性霉素的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4与SEQ ID NO.5所示的透明颤菌血红蛋白(Vhb)、S-腺苷甲硫氨酸合成酶(Metk)、两性霉素合成基因簇调控因子(AmphRIV)、次级代谢产物全局调控因子(AraC)以及红霉素强启动子ermE*p序列导入结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050获得。通过导入并过表达上述基因，使重组结节链霉菌中，两性霉素B产量提高约45％，副产物两性霉素A产量降低60％，并缩短在发酵过程中菌体生长周期，达到提升生产效率的目的。
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公开(公告)号：CN110577921B
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN201910450827.5
申请日：2019-05-28
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是敲除结节链霉菌ZJB2016050(Streptomyces nodosus ZJB2016050)内两性霉素B的竞争支路获得的；通过导入功能基因，使两性霉素B骨架合成前体供给量全面提升，提高菌种对营养物质的利用率，改变目标产物的营养物质流向。通过敲除竞争基因簇提高两性霉素B的产量，可提高两性霉素B产量25％，提高菌种在发酵过程中对培养基营养成分的利用率，缩短发酵周期从而降低染菌风险。
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公开(公告)号：CN110305926B
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN201910446775.4
申请日：2019-05-27
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种基于两性霉素B代谢途径的发酵方法，所述方法包括：将结节链霉菌接种至发酵培养基，25～30℃、150～250r/min条件下培养96～168h，在发酵培养第12～36h内向发酵液中添加关键差异代谢物质，发酵结束后，发酵产物经分离纯化获得所述的两性霉素B。通过在AMB发酵培养至12～36h添加各种关键差异代谢物，来提高AMB的发酵水平。从本发明实施例中可以看出，发酵培养24h添加丙酮酸可以使AMB的产量由5360mg/L提高至6645mg/L；在培养基中添加D‑泛酸钙或烟酰胺可使AMB产量分别提高18.6％和12.5％。
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公开(公告)号：CN110343650B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201910451258.6
申请日：2019-05-28
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是敲除结节链霉菌ZJB2016050(Streptomyces nodosus ZJB2016050)内两性霉素B的竞争支路后，再将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示功能基因串联序列导入获得的；通过导入功能基因，使两性霉素B骨架合成前体供给量全面提升，提高菌种对营养物质的利用率，改变目标产物的营养物质流向。通过敲除竞争支路提高AmB产量约20％，副产物两性霉素A降低40％，通过过表达串联功能基因验证提高三类前体乙酰辅酶A，丙二酰辅酶A和甲基丙二酰辅酶A大幅提升两性霉素B的产量，最终在5L发酵罐发酵，两性霉素B产量可达到16g/L。
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公开(公告)号：CN110564718A
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201910450165.1
申请日：2019-05-28
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及本发明涉及一种高通量诱变筛选高产两性霉素B结节链霉菌的方法，以及筛选到的诱变株，由诱变株获得的重组工程菌及应用。本发明筛选获得的一株高产两性霉素B结节链霉菌菌株——结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050。本发明的有益效果主要体现在：1、通过高通量筛选高产两性霉素B菌种的方法，能够方便快速高效地检测两性霉素B的产量，提高了诱变育种和基因工程菌株的筛选或验证效率。2、诱变育种获得的结节链霉菌N5，相对原始菌株N3，两性霉素B产量提高了20％，能够作为基因工程菌的原始菌株。3、通过过表达功能基因分别提高两性霉素B的产量，其中乙酰辅酶A羧化酶1(acc1)提高两性霉素B产量20％。4、卡那霉素价格优廉、抗菌谱广、杀菌作用强，适用于工业中使用，对于企业总体收益率有较强提高作用，以实验室5L罐为计算，能降低成本约2000元/罐。
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