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公开(公告)号：CN115948373B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202211412004.1
申请日：2022-11-11
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于蛋白质理性设计及酶工程领域，具体涉及一种褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM及其应用。本发明以褐藻胶裂解酶Pl7Aa为出发模板，通过结合二硫键和自由能优化两种蛋白质理性设计策略，获得了热稳定性提升的褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将本发明获得的褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM在40℃和45℃的水浴处理1小时后，剩余酶活分别是Pl7Aa的2.2倍和8.2倍，具有良好的热稳定性。本发明获得的褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM可用于制备重组载体、重组菌株，以毕赤酵母为重组表达宿主，实现了Pl7AaM的高效表达，用于制备褐藻胶寡糖，进一步为其广泛应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN117230051A
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202311522949.3
申请日：2023-11-16
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学以及蛋白质工程领域，具体涉及一种褐藻胶裂解酶突变体Pl7MaM及其制备方法与应用。本发明以褐藻胶裂解酶Pl7Ma为出发模板，首先通过截短不同蛋白功能模块获得Pl7Ma2，其酶比活是Pl7Ma的1.31倍；然后以Pl7Ma2为模板，通过结合二硫键和温度因子优化两种蛋白质理性设计策略，获得了热稳定性提升的突变体Pl7MaM。本发明获得的突变体P17MaM在45℃、50℃和55℃的水浴处理60分钟后的剩余酶活分别是Pl7Ma的3.14倍、4.83倍和6.52倍，酶活力及热稳定性均显著提升，可进一步用于制备海藻寡糖，为下一步产业化应用奠定了坚实基础。
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公开(公告)号：CN117965508B
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202410088844.X
申请日：2024-01-23
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学及蛋白质工程技术领域，具体涉及一种褐藻胶裂解酶突变体Pl7M及其应用。本发明以褐藻胶裂解酶Pl7AaM为出发模板，通过定点饱和突变和组合突变获得酶比活提升的突变体Pl7M。本发明获得的突变体Pl7M酶比活为658.9U/mg，是出发模板Pl7AaM的1.53倍。而且，本发明以枯草芽孢杆菌为宿主实现了突变体Pl7M高效表达，为突变体Pl7M的产业化应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN118325879A
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202410756047.4
申请日：2024-06-13
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学及蛋白质工程技术领域，具体设计一种褐藻胶裂解酶突变体PL31PtM及其应用。本发明通过密码子优化获得褐藻胶裂解酶基因序列PL31Pt，其核苷酸序列信息如SEQ ID NO.1所示，并将该序列用于重组褐藻胶裂解酶PL31Pt工程菌的构建过程，进一步以重组PL31Pt为模板，通过蛋白理性设计获得热稳定性提升的突变体PL31PtM，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；通过高密度发酵实现突变体PL31PtM高效制备。本发明获得的突变体PL31PtM可用于褐藻胶寡糖的制备过程，应用范围广泛。
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公开(公告)号：CN115948373A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202211412004.1
申请日：2022-11-11
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于蛋白质理性设计及酶工程领域，具体涉及一种褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM及其应用。本发明以褐藻胶裂解酶Pl7Aa为出发模板，通过结合二硫键和自由能优化两种蛋白质理性设计策略，获得了热稳定性提升的褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将本发明获得的褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM在40℃和45℃的水浴处理1小时后，剩余酶活分别是Pl7Aa的2.2倍和8.2倍，具有良好的热稳定性。本发明获得的褐藻胶裂解酶突变体Pl7AaM可用于制备重组载体、重组菌株，以毕赤酵母为重组表达宿主，实现了Pl7AaM的高效表达，用于制备褐藻胶寡糖，进一步为其广泛应用奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117965508A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410088844.X
申请日：2024-01-23
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学及蛋白质工程技术领域，具体涉及一种褐藻胶裂解酶突变体Pl7M及其应用。本发明以褐藻胶裂解酶Pl7AaM为出发模板，通过定点饱和突变和组合突变获得酶比活提升的突变体Pl7M。本发明获得的突变体Pl7M酶比活为658.9U/mg，是出发模板Pl7AaM的1.53倍。而且，本发明以枯草芽孢杆菌为宿主实现了突变体Pl7M高效表达，为突变体Pl7M的产业化应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN117264933A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202310522662.4
申请日：2023-05-10
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明涉及酶工程技术领域，具体的说是一种几丁质酶突变体ChiM‑BL及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，以前期获得的几丁质酶ChiM为模板，通过优化几丁质酶结合区域和linker肽段获得催化活性提升的突变体ChiM‑BL。突变体ChiM‑BL可根据反应时间高效定向制备不同聚合度几丁质寡糖，表明其在几丁质寡糖酶法制备领域具有良好的应用价值，通过理性设计获得酶催化效率提升的几丁质酶突变体ChiM‑BL并对其进行特性表征，为其产业化应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN116790561A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202310889388.4
申请日：2023-07-20
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学以及蛋白质工程领域，特别涉及一种几丁质酶突变体ChiPcM及其应用。本发明通过基因克隆获得几丁质酶ChiPc，进一步利用理性设计获得热稳定性提升的突变体ChiPcM，最终获得的突变体ChiPcM的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其热稳定性显著提高，在55℃、60℃和65℃热处理60分钟后的剩余酶活分别是出发模板ChiPc的2.1倍，5.1倍和9.8倍。本发明构建的几丁质酶突变体ChiPcM为其下一步产业化应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN116590267A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310458822.3
申请日：2023-04-24
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种几丁质脱乙酰基酶突变体、重组表达载体、重组工程菌及其筛选方法。本发明首先通过对出发模板几丁质脱乙酰基酶CdaBa进行二硫键设计，获得2对有效的二硫键突变体。通过对出发模板几丁质脱乙酰基酶CdaBa进行理性单点突变，获得4个有效单点突变体。最后将2对有效的二硫键突变体和4个有效的单点突变体进行组合突变，进一步筛选获得最佳突变体CdaBaM；这种突变体进一步应用于重组载体及重组菌株的制备过程。采用本发明方法制得的突变体CdaBaM在70℃热处理30分钟和60分钟，剩余酶活分别为87.4％和52.8％，是出发模板几丁质脱乙酰基酶CdaBa的5.8倍和10.4倍。
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公开(公告)号：CN118325879B
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410756047.4
申请日：2024-06-13
Applicant: 深圳润康生态环境股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学及蛋白质工程技术领域，具体设计一种褐藻胶裂解酶突变体PL31PtM及其应用。本发明通过密码子优化获得褐藻胶裂解酶基因序列PL31Pt，其核苷酸序列信息如SEQ ID NO.1所示，并将该序列用于重组褐藻胶裂解酶PL31Pt工程菌的构建过程，进一步以重组PL31Pt为模板，通过蛋白理性设计获得热稳定性提升的突变体PL31PtM，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；通过高密度发酵实现突变体PL31PtM高效制备。本发明获得的突变体PL31PtM可用于褐藻胶寡糖的制备过程，应用范围广泛。
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