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公开(公告)号：CN108676787A
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201810519982.3
申请日：2018-05-28
Applicant: 湖北大学
CPC classification number: C12N9/2482 , C12P19/14 , C12Y302/01008
Abstract: 本发明公开了一种比酶活提高的嗜热嗜碱木聚糖酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明将来源于Bacillus halodurans S7的嗜热嗜碱木聚糖酶编码基因xyn10A进行倾向错误PCR进行随机诱变，筛选获得单突变体A262T；通过对蛋白底物进口处设计的4点饱和突变，得到3点突变V220N Q251S W254R；然后将两者整合在一起得到4点突变V220N Q251S W254R A262T。所得三株突变体酶表现出了较高的比酶活，分别为野生型酶的2.01、3.41、4.42倍。相比野生型嗜热嗜碱木聚糖酶，本发明的突变体酶更有利于其在工业上的应用，尤其是在低聚木糖制备和在工业造纸助漂方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN105296486A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510799249.8
申请日：2015-11-18
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种启动子文库，包括至少两个启动子，其中一个启动子包括SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，另一个启动子包括SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。在构建启动子文库时，以整合型载体pDG1730作为出发载体，插入转录终止子T1T2、T0以及报告基因，得到启动子探针载体pDGT-GFP；再选取四个在枯草杆菌中具有强转录强度的启动子作为出发启动子，设计24条在退火后能形成相同黏性末端的寡核苷酸引物，借助寡核苷酸退火,经载体连接转化得到启动子文库。通过测定转化子的相对荧光强度，筛选得到两个比强启动子P43和出发启动子更强的启动子，经筛选得到的启动子可用于增强蛋白的表达。
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公开(公告)号：CN108676787B
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN201810519982.3
申请日：2018-05-28
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种比酶活提高的嗜热嗜碱木聚糖酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明将来源于Bacillus halodurans S7的嗜热嗜碱木聚糖酶编码基因xyn10A进行倾向错误PCR进行随机诱变，筛选获得单突变体A262T；通过对蛋白底物进口处设计的4点饱和突变，得到3点突变V220N Q251S W254R；然后将两者整合在一起得到4点突变V220N Q251S W254R A262T。所得三株突变体酶表现出了较高的比酶活，分别为野生型酶的2.01、3.41、4.42倍。相比野生型嗜热嗜碱木聚糖酶，本发明的突变体酶更有利于其在工业上的应用，尤其是在低聚木糖制备和在工业造纸助漂方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN107099520B
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN201710516347.5
申请日：2017-06-29
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米赤霉烯酮降解酶及其编码基因，该降解酶具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或该降解酶是在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列基础上缺失、替换、插入或/和添加一个至几个氨基酸的保守性突变而获得的保守性变异体。本发明所述的玉米赤霉烯酮降解酶具有高酶活、pH耐受性好等优点，可以广泛应用于玉米赤霉烯酮及其几种衍生物的酶解，尤其对于玉米赤霉烯酮和β‑玉米赤霉烯醇的底物特异性比较好。
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公开(公告)号：CN110358781A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910701617.9
申请日：2019-07-31
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种酸性哺乳动物几丁质酶编码基因和应用，该基因具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。本发明利用体外构建无抗生素筛选标记的多拷贝的方法，实现了酸性哺乳动物几丁质酶的高量表达，同时利用辅助因子Hac1的共表达，实现了酸性哺乳动物几丁质酶表达量的进一步提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105296486B
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201510799249.8
申请日：2015-11-18
Applicant: 湖北大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12Q1/6897 , C12Q1/02 , C40B40/06 , C40B50/06 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种启动子文库，包括至少两个启动子，其中一个启动子包括SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，另一个启动子包括SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。在构建启动子文库时，以整合型载体pDG1730作为出发载体，插入转录终止子T1T2、T0以及报告基因，得到启动子探针载体pDGT‑GFP；再选取四个在枯草杆菌中具有强转录强度的启动子作为出发启动子，设计24条在退火后能形成相同黏性末端的寡核苷酸引物，借助寡核苷酸退火,经载体连接转化得到启动子文库。通过测定转化子的相对荧光强度，筛选得到两个比强启动子P43和出发启动子更强的启动子，经筛选得到的启动子可用于增强蛋白的表达。
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公开(公告)号：CN107699560A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201710956947.3
申请日：2017-10-16
Applicant: 湖北大学
CPC classification number: C12N15/1093 , C12N9/2417 , C12N15/113 , C12N15/75 , C12Y302/01001 , C40B40/06 , C40B50/06
Abstract: 本发明涉及一种启动子文库，用于在枯草芽胞杆菌中高效表达淀粉酶BLA，所述文库的探针载体为整合型载体，以避免质粒拷贝数对文库表征的影响，在BLA表达框上下游均有强转录终止子，避免上下游遗传元件对BLA表达的影响，所述文库的构建方法包括寡核苷酸退火，IIs型限制性酶和连接酶同时酶切/酶连。为了提高探针载体整合效率及降低内源性淀粉酶AmyE的背景，在启动子文库转化枯草芽孢杆菌时，使用CRISPR/cas9系统在整合位点处引入DNA双链断裂。转化后涂布于底物平板，对水解圈大的转化子通过96孔板复筛，复筛后较强的转化子再通过摇瓶进一步复筛。经由上述步骤，得到比P43表达BLA更高效的启动子22个，其中7个杂合启动子的强度高于所有出发启动子。
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公开(公告)号：CN106191083A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610570895.1
申请日：2016-07-19
Applicant: 湖北大学
CPC classification number: C12N9/248 , C12N9/2482 , C12P19/04 , C12P19/14 , C12Y302/01008 , C12Y302/01037
Abstract: 本发明涉及一种比酶活提高的木聚糖酶突变体及其编码基因与应用。木聚糖酶突变体，包括(a)、(b)或(c)所示的蛋白质；(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有木聚糖酶活性的由(a)衍生的蛋白质；(c)编码(a)的核苷酸序列和编码(b)的核苷酸序列经分子杂交后编码出的并且具有木聚糖酶活性氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所述的木聚糖酶突变体比酶活提高了2.8倍，可以用于降解木聚糖底物，具有作用温度和pH范围广，具有良好的耐酸耐碱性条件能力等优点。
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公开(公告)号：CN105755023A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201610156145.X
申请日：2016-03-18
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米赤霉烯酮降解酶基因及高产菌株。一种玉米赤霉烯酮降解酶基因，包括(a)、(b)或(c)的DNA分子：(a)具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的DNA分子；(b)在严格条件下与(a)所述的核苷酸序列杂交且编码具有玉米赤霉烯酮降解酶活性的蛋白的DNA分子；(c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列具有90％以上同源性的核苷酸序列的DNA分子。本发明通过上述序列构建了用于生产玉米赤霉烯酮降解酶的高产菌株并进一步提供了一种高密度发酵的方法。通过高产菌株及高密度发酵方法可以高效分泌表达玉米赤霉烯酮降解酶，其发酵上清能迅速高效地降解ZEN。
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公开(公告)号：CN106191083B
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201610570895.1
申请日：2016-07-19
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种比酶活提高的木聚糖酶突变体及其编码基因与应用。木聚糖酶突变体，包括(a)、(b)或(c)所示的蛋白质；(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有木聚糖酶活性的由(a)衍生的蛋白质；(c)编码(a)的核苷酸序列和编码(b)的核苷酸序列经分子杂交后编码出的并且具有木聚糖酶活性氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所述的木聚糖酶突变体比酶活提高了2.8倍，可以用于降解木聚糖底物，具有作用温度和pH范围广，具有良好的耐酸耐碱性条件能力等优点。
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