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公开(公告)号：CN108048480B
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN201711193064.8
申请日：2017-11-24
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种基于酿酒酵母的split‑TEV‑Fast系统方法及其在检测蛋白互作中的应用，包括：1)构建载体pESD‑PPI，其含受半乳糖诱导的一个正向启动子和一个双向启动子，所述正向启动子用以表达TEV‑Fast蛋白酶底物与FLAG和HA标签序列，所述双向启动子用以表达拆分的TEV‑Fast蛋白酶和待测目的蛋白；2)用半乳糖同时诱导启动子，引发下游基因等量表达；3)利用分别识别FLAG和HA标签序列的荧光抗体对细胞进行标记；4)利用流式细胞仪检测细胞表面荧光信号，根据单双荧光信号判断蛋白之间相互作用的强度。本发明在TEV‑Fast蛋白酶及其底物‑COOH端使用不同强度的内质网滞留信号肽，可扩大检测蛋白互作的范围，并根据最终检测的单双荧光信号强度的比例分析蛋白互作的强弱。
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公开(公告)号：CN106191083A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610570895.1
申请日：2016-07-19
Applicant: 湖北大学
CPC classification number: C12N9/248 , C12N9/2482 , C12P19/04 , C12P19/14 , C12Y302/01008 , C12Y302/01037
Abstract: 本发明涉及一种比酶活提高的木聚糖酶突变体及其编码基因与应用。木聚糖酶突变体，包括(a)、(b)或(c)所示的蛋白质；(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有木聚糖酶活性的由(a)衍生的蛋白质；(c)编码(a)的核苷酸序列和编码(b)的核苷酸序列经分子杂交后编码出的并且具有木聚糖酶活性氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所述的木聚糖酶突变体比酶活提高了2.8倍，可以用于降解木聚糖底物，具有作用温度和pH范围广，具有良好的耐酸耐碱性条件能力等优点。
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公开(公告)号：CN106191083B
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201610570895.1
申请日：2016-07-19
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种比酶活提高的木聚糖酶突变体及其编码基因与应用。木聚糖酶突变体，包括(a)、(b)或(c)所示的蛋白质；(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有木聚糖酶活性的由(a)衍生的蛋白质；(c)编码(a)的核苷酸序列和编码(b)的核苷酸序列经分子杂交后编码出的并且具有木聚糖酶活性氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所述的木聚糖酶突变体比酶活提高了2.8倍，可以用于降解木聚糖底物，具有作用温度和pH范围广，具有良好的耐酸耐碱性条件能力等优点。
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公开(公告)号：CN108048480A
公开(公告)日：2018-05-18
申请号：CN201711193064.8
申请日：2017-11-24
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种基于酿酒酵母的split‑TEV‑Fast系统方法及其在检测蛋白互作中的应用，包括：1)构建载体pESD‑PPI，其含受半乳糖诱导的一个正向启动子和一个双向启动子，所述正向启动子用以表达TEV‑Fast蛋白酶底物与FLAG和HA标签序列，所述双向启动子用以表达拆分的TEV‑Fast蛋白酶和待测目的蛋白；2)用半乳糖同时诱导启动子，引发下游基因等量表达；3)利用分别识别FLAG和HA标签序列的荧光抗体对细胞进行标记；4)利用流式细胞仪检测细胞表面荧光信号，根据单双荧光信号判断蛋白之间相互作用的强度。本发明在TEV‑Fast蛋白酶及其底物‑COOH端使用不同强度的内质网滞留信号肽，可扩大检测蛋白互作的范围，并根据最终检测的单双荧光信号强度的比例分析蛋白互作的强弱。
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