HTT的CRISPR/Cas9-gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型

    公开(公告)号:CN108690844B

    公开(公告)日:2021-10-15

    申请号:CN201810513348.9

    申请日:2018-05-25

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型,涉及生物技术领域。本发明的打靶序列对包括L序列和R序列,L序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,R序列的碱基序列对如SEQ ID NO.2所示。本发明的打靶质粒包括第一载体质粒和上述的打靶序列对,打靶序列对构建至第一载体质粒中。本发明的HD细胞模型由PolyQ Donor质粒以及上述打靶质粒共转染细胞而得。本发明以分化的神经元细胞为载体构建HD细胞模型,为探索mHtt蛋白在影响或改变分化的神经细胞内环境方面的研究、分化的神经元细胞内由mHtt蛋白引起的各种信号通路、代谢通路及胞内稳态的变化提供了研究平台。

    利用CRISPR/Cas9技术构建的亨廷顿病原位敲入小鼠模型及构建方法

    公开(公告)号:CN109112162A

    公开(公告)日:2019-01-01

    申请号:CN201811006750.4

    申请日:2018-08-30

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9技术构建的亨廷顿病原位敲入小鼠模型及构建方法,涉及生物技术领域。该方法其包括:设计gRNA靶点序列对,检测其体外Cas9酶切活性,挑选体外活性合格的gRNA靶点序列对备用;合成Donor DNA;将Cas9 mRNA、Donor DNA以及体外活性合格的gRNA靶点序列对混合均匀,对供体小鼠进行胚胎显微注射,再将胚胎移植到受体小鼠中备孕,繁殖子代即得。本发明不改变小鼠HD基因的表达调控,仅改变其特定致病基因的长度,利用CRISPR/Cas9技术成功构建HD原位敲入小鼠模型,为进一步模拟人类HD缓慢且迟发的发病过程及后续临床治疗研究提供一种新途径。

    HTT的CRISPR/Cas9-gRNA打靶序列对、质粒及其应用

    公开(公告)号:CN108251451A

    公开(公告)日:2018-07-06

    申请号:CN201810042482.5

    申请日:2018-01-16

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对、质粒及其应用,涉及生物技术领域。本发明的HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对包括L序列和R序列,所述L序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,所述R序列的碱基序列如SEQ ID NO.2或3所示。本发明的HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶质粒包括载体质粒和上述打靶序列对,打靶序列对构建至载体质粒中。本发明还提供了上述打靶序列对在制作HTT基因突变模型中的应用。本发明为HD的细胞模型和转基因动物模型的建立提供了可靠的基础,促进了HD的模型建造及基因治疗的发展;为HD治疗药物、治疗方法的筛选奠定了实验基础。

    Htt基因转录RNA Exon1内剪接现象的检测方法

    公开(公告)号:CN109609605A

    公开(公告)日:2019-04-12

    申请号:CN201910078622.9

    申请日:2019-01-28

    Abstract: 本发明公开了Htt基因转录RNA Exon1内剪接现象的检测方法,涉及生物技术领域。该方法包括:提取RNA;将RNA逆转录得到cDNA;以cDNA为模板进行套式PCR,套式PCR完成后,对产物进行检测分析。该方法通过对人源和鼠源细胞以及动物组织进行检测,分别检测到了Exon1的剪接,有效证明了Htt基因转录RNA Exon1内剪接现象的存在,Exon1的剪接,有效证明了Htt基因转录RNA Exon1内剪接现象的存在,对HD细胞模型中检测不到内源性敲入PolyQ转录体的现象给出了合理的解释,同时,为HD的致病机理的研究及其治疗提供进一步的理论基础。

    HTT的CRISPR/Cas9-gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型

    公开(公告)号:CN108690844A

    公开(公告)日:2018-10-23

    申请号:CN201810513348.9

    申请日:2018-05-25

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了HTT的CRISPR/Cas9‑gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型,涉及生物技术领域。本发明的打靶序列对包括L序列和R序列,L序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,R序列的碱基序列对如SEQ ID NO.2所示。本发明的打靶质粒包括第一载体质粒和上述的打靶序列对,打靶序列对构建至第一载体质粒中。本发明的HD细胞模型由PolyQ Donor质粒以及上述打靶质粒共转染细胞而得。本发明以分化的神经元细胞为载体构建HD细胞模型,为探索mHtt蛋白在影响或改变分化的神经细胞内环境方面的研究、分化的神经元细胞内由mHtt蛋白引起的各种信号通路、代谢通路及胞内稳态的变化提供了研究平台。

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