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公开(公告)号：CN103060447A
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201210581310.8
申请日：2012-12-27
CPC分类号： Y02A50/451 , Y02A50/59
摘要： 本发明公开了一种猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌及鸡伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明利用三重实时荧光PCR方法，将猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌共有序列用于检测猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌，伤寒沙门氏菌的特异序列用于检测伤寒沙门氏菌，鸡伤寒沙门氏菌的特异序列用于检测鸡伤寒沙门氏菌，通过一次实时荧光PCR扩增来判断样品中是否受到猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌及鸡伤寒沙门氏菌的污染，再通过单一荧光PCR扩增区分猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌，检测快速，可在31h完成从制备样品到出具检测结果的过程，结果可靠，且灵敏度高、特异性强。
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公开(公告)号：CN102146469B
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201110043486.3
申请日：2011-02-22
CPC分类号： Y02A50/451
摘要： 本发明公开了一种副溶血性弧菌双重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明利用双重实时荧光PCR方法，以副溶血性弧菌的toxR基因和tdh基因作为靶基因，toxR基因用于特异性检测副溶血性弧菌，tdh基因用于检测是否携带毒力基因，优化设计引物、探针和反应条件，使得在一次扩增反应中对副溶血性弧菌进行特异性检测的同时检测其毒力基因，检测快速，8-10小时可以完成从制备样品到出具检测结果的过程，不受假阳性和交叉污染等干扰，结果可靠，且灵敏度高、特异性强，为副溶血性弧菌进行流行病学调查提供了有利工具。适用于食品以及海产品的检验检疫，可供检验检疫局、疾病预防控制中心和质量监督部门对样品进行简便、快速、准确的检测。
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公开(公告)号：CN105821123A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610206434.6
申请日：2016-04-01
CPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/686 , C12Q2561/101 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/114 , C12Q2531/113
摘要： 本发明公开了一种基于单增李斯特菌毒力基因的三重实时荧光定量PCR检测用引物、MGB探针及检测方法。本发明针对单增李斯特菌hlyA、inlA和plcB基因科学设计特异性引物，其DNA序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示；同时提供MGB探针，其DNA序列如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.9所示。基于所述引物和MGB探针，本发明整体优化了实时荧光PCR检测体系和的反应程序条件，成功建立了高通量的单增李斯特菌的TaqMan ?MGB探针三重实时荧光定量PCR检测方法，操作简单、安全，最低检测细菌浓度为100CFU/mL，整个扩增过程在50min以内，具有更加高的灵敏度、特异性和稳定性，可以很好地满足食品安全中监管中单增李斯特菌的快速检测和鉴定，能快速、准确测定样本中单增李斯特菌的含量，同时可以分析单增李斯特菌菌株的三个毒力基因携带情况，可用于其流行病学溯源和毒力强弱分析。
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公开(公告)号：CN102808024A
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201210272737.X
申请日：2012-08-01
摘要： 本发明公开了一种PCR-焦磷酸法检测副溶血弧菌的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明根据副溶血弧菌toxR基因(GenBank:NC_004603.1)序列中的保守区域，用PyroMark Assay Design软件设计PCR引物和测序引物，建立了PCR-焦磷酸测序，从DNA碱基序列水平上检测副溶血弧菌的方法。本发明先对目标片段进行PCR扩增，保证扩增片段的特异性，再用扩增产物制备单链模板，在测序引物的引导下进行焦磷酸测序。检测的所得碱基序列，用NCBI网站的BLAST功能反复比对时发现，toxR基因测序引物后的碱基序列具有良好的特异性，测序引物后34bp连续DNA序列为：CCAAGGATTCACAGCAGAAGCCACAGGTGCTTTT的就可鉴定含有VP。
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公开(公告)号：CN103060447B
公开(公告)日：2016-02-17
申请号：CN201210581310.8
申请日：2012-12-27
CPC分类号： Y02A50/451 , Y02A50/59
摘要： 本发明公开了一种猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌及鸡伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明利用三重实时荧光PCR方法，将猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌共有序列用于检测猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌，伤寒沙门氏菌的特异序列用于检测伤寒沙门氏菌，鸡伤寒沙门氏菌的特异序列用于检测鸡伤寒沙门氏菌，通过一次实时荧光PCR扩增来判断样品中是否受到猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌及鸡伤寒沙门氏菌的污染，再通过单一荧光PCR扩增区分猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌，检测快速，可在31h完成从制备样品到出具检测结果的过程，结果可靠，且灵敏度高、特异性强。
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公开(公告)号：CN102747144B
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201210141228.3
申请日：2012-05-08
摘要： 本发明公开了一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明利用三重实时荧光PCR方法，将沙门氏菌的aceA基因用于检测不同血清型沙门氏菌，肠炎沙门氏菌的特异序列用于检测肠炎沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌的STM4599序列用于特异性检测鼠伤寒沙门氏菌，优化反应条件，通过一次实时荧光PCR扩增来判断样品中是否受到沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌的污染，检测快速，可在30h完成从制备样品到出具检测结果的过程，不受假阳性和交叉污染等干扰，结果可靠，且灵敏度高、特异性强，为沙门氏菌进行流行病学调查提供了有利工具。
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公开(公告)号：CN102851361A
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201210237946.0
申请日：2012-07-10
CPC分类号： Y02A50/451
摘要： 本发明公开了一种沙门氏菌肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌PCR焦磷酸法的检测引物试剂盒和检测方法。本发明根据沙门氏菌aceA基因、肠炎沙门氏菌特异序列、鼠伤寒沙门氏菌的STM4599序列中的保守区域，分别设计扩增引物和测序引物，对目标片段进行PCR扩增，再用扩增产物制备单链模板，进行焦磷酸测序，测序引物后前30个碱基序列为GCCTGTGGGTACTTCTCCTGCCAGTATAAT判断样品中含有沙门氏菌，测序引物后前30个碱基序列为CCTGTTGTCTGCTCACCATTCGCCAGCCAC和TACAACCGGAGTGCACATTAATCCCGCAGC则分别判断含有肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌。
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公开(公告)号：CN102851361B
公开(公告)日：2014-07-02
申请号：CN201210237946.0
申请日：2012-07-10
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： Y02A50/451
摘要： 本发明公开了一种沙门氏菌肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌PCR焦磷酸法的检测引物试剂盒和检测方法。本发明根据沙门氏菌aceA基因、肠炎沙门氏菌特异序列、鼠伤寒沙门氏菌的STM4599序列中的保守区域，分别设计扩增引物和测序引物，对目标片段进行PCR扩增，再用扩增产物制备单链模板，进行焦磷酸测序，测序引物后前30个碱基序列为GCCTGTGGGTACTTCTCCTGCCAGTATAAT判断样品中含有沙门氏菌，测序引物后前30个碱基序列为CCTGTTGTCTGCTCACCATTCGCCAGCCAC和TACAACCGGAGTGCACATTAATCCCGCAGC则分别判断含有肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌。
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公开(公告)号：CN102816844B
公开(公告)日：2014-07-02
申请号：CN201210281539.X
申请日：2012-08-08
摘要： 本发明公开了一种PCR-焦磷酸法检测金黄色葡萄球菌的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明根据金黄色葡萄球菌血浆凝固酶DNA碱基列中的保守区域，用PyroMark？Assay？Design软件设计PCR引物和测序引物，建立了PCR-焦磷酸测序，从DNA碱基序列水平上检测金黄色葡萄球菌的方法。本发明先对目标片段进行PCR扩增，保证扩增片段的特异性，再用扩增产物制备单链模板，在测序引物的引导下进行焦磷酸测序。检测的所得碱基序列，用NCBI网站的BLAST功能反复比对时发现，血浆凝固酶DNA测序引物后的碱基序列具有良好的特异性，测序引物后29个DNA碱基序列为CAACCGACGACACCGAACCCTATTTTAGA时就可鉴定金黄色葡萄球菌。
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公开(公告)号：CN102816844A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210281539.X
申请日：2012-08-08
摘要： 本发明公开了一种PCR-焦磷酸法检测金黄色葡萄球菌的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明根据金黄色葡萄球菌血浆凝固酶DNA碱基列中的保守区域，用PyroMark Assay Design软件设计PCR引物和测序引物，建立了PCR-焦磷酸测序，从DNA碱基序列水平上检测金黄色葡萄球菌的方法。本发明先对目标片段进行PCR扩增，保证扩增片段的特异性，再用扩增产物制备单链模板，在测序引物的引导下进行焦磷酸测序。检测的所得碱基序列，用NCBI网站的BLAST功能反复比对时发现，血浆凝固酶DNA测序引物后的碱基序列具有良好的特异性，测序引物后29个DNA碱基序列为CAACCGACGACACCGAACCCTATTTTAGA时就可鉴定金黄色葡萄球菌。
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