一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法

    公开(公告)号:CN104152541A

    公开(公告)日:2014-11-19

    申请号:CN201410217600.3

    申请日:2014-09-03

    IPC分类号: C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法。该方法所涉及的引物由烟草内源基因元件NR(硝酸还原酶基因)及外源基因元件(包括35S启动子、NOS终止子、NPTII筛选标记基因)组成。通过四重PCR扩增,在一次PCR反应中可同时检测NR基因及3个外源基因,检测方法包括以下步骤:四对引物稀释成等摩尔浓度后按1:1:1:1(V/V)比例混合,在20μL反应体系中添加Mg2+1.5mmol/L、dNTP125μmol/L、Taq酶1U、混合引物1μmol/L,DNA100ng,在退火温度65℃,循环数35个的PCR反应条件下,能够有效检测出烤后烟叶百分比含量为0.9%(V/V)的转基因成分。本发明的效果是:重复性强、稳定性好、操作简单、节约成本。

    一种生产低糖高烟碱烟叶的烤烟种质培育方法

    公开(公告)号:CN104711286A

    公开(公告)日:2015-06-17

    申请号:CN201410394649.6

    申请日:2014-08-12

    发明人: 赵杰宏 余婧 韩洁

    IPC分类号: C12N15/84 C12N15/29 A01H5/00

    摘要: 本发明公开了一种生产低糖高烟碱烟叶的烤烟种质培育方法,包括下列步骤:(1)人工合成烟草钾离子转运体HAK1基因序列;(2)构建CaMV 35S驱动HAK1的植物表达载体pBI-HAK1;(3)转化土壤农杆菌和烟草外植体;(4)转基因株系的分化、移栽。本发明既降低了烤后烟叶的糖含量,同时也增加了烟碱含量,有利于生产低糖高烟碱的烟叶原料。

    一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法

    公开(公告)号:CN104152541B

    公开(公告)日:2016-04-27

    申请号:CN201410217600.3

    申请日:2014-09-03

    IPC分类号: C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法。该方法所涉及的引物由烟草内源基因元件NR(硝酸还原酶基因)及外源基因元件(包括35S启动子、NOS终止子、NPTII筛选标记基因)组成。通过四重PCR扩增,在一次PCR反应中可同时检测NR基因及3个外源基因,检测方法包括以下步骤:四对引物稀释成等摩尔浓度后按1:1:1:1(V/V)比例混合,在20μL反应体系中添加Mg2+1.5mmol/L、dNTP125μmol/L、Taq酶1U、混合引物1μmol/L,DNA100ng,在退火温度65℃,循环数35个的PCR反应条件下,能够有效检测出烤后烟叶百分比含量为0.9%(V/V)的转基因成分。本发明的效果是:重复性强、稳定性好、操作简单、节约成本。