一种调控NtCBT基因在烟草组织中表达的方法及其应用

    公开(公告)号:CN110387383B

    公开(公告)日:2022-12-06

    申请号:CN201910695031.6

    申请日:2019-07-30

    摘要: 本发明属于植物基因工程技术领域,尤其涉及一种调控NtCBT基因在烟草组织中表达的方法及其应用。本发明从栽培烟草K326基因组DNA中克隆获得NtCBT基因启动子,并在栽培烟草中验证NtCBT基因启动子三种类型的片段缺失后驱动GUS基因的表达模式;根据启动子顺式作用元件分析以及片段缺失实验,聚焦启动子中控制腺毛特异表达的核心区域。本发明研究发现启动子‑198bp~‑192bp片段(CAGTTA)的缺失能够使NtCBT基因由腺毛特异表达变为组成性表达,为解析烟草类西柏烷代谢途径的分子调控机制、腺毛特异启动子精准调控关键酶基因的表达提供新策略,为培育高类西柏烷烟草种质奠定研究基础。

    抽核缓冲液、缓冲液组合、制备方法和应用

    公开(公告)号:CN115261446A

    公开(公告)日:2022-11-01

    申请号:CN202210980928.5

    申请日:2022-08-16

    摘要: 本申请公开了抽核缓冲液、缓冲液组合、制备方法和应用,用于抽提烟草幼嫩组织单细胞核测序样本,以便对其进行snRNA‑seq测序。该抽核缓冲液包含:0.5~1.5M DTT,0.3~0.75%Triton×‑100,0.5~1.5tablet/50mL蛋白酶抑制剂,0.3~0.6U/μL RNA酶抑制剂,0.05~0.15mM精胺和0.3~0.7mM亚精胺的PBS溶液,pH值为6.5~7.5。通过本申请的抽核缓冲液、缓冲液组合及采用该缓冲液组合制备而成的烟草单细胞核样品具有背景纯度高、结团率低,保持细胞核形态完整和细胞核RNA质量满足snRNA‑seq测序的优点。

    一种衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法

    公开(公告)号:CN114047267A

    公开(公告)日:2022-02-15

    申请号:CN202111349477.7

    申请日:2021-11-15

    摘要: 本发明公开了一种衍生化‑气相色谱‑质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法,包括以下步骤:将内标物质与提取溶剂加入到烟草根系样品中获取提取溶液;依次加入甲醇与HCl活化固相萃取柱,活化后缓慢加入提取溶液,并依次加入HCl和甲醇淋洗,氨水甲醇溶液洗脱,氮气吹干得到净化的烟酸;向净化的烟酸中加入丙酮与衍生化试剂,加入缓冲溶液后混匀后进行五氟溴苄衍生化;加入水与萃取溶剂,涡旋混匀并加入NaCl,再次涡旋使NaCl完全溶解,离心后取沉淀相于微量色谱瓶中;采用气相色谱‑质谱‑选择性离子扫描的方式对产物进行分离与定量。本发明可以解决现有技术检测烟酸存在的灵敏度相对较低,专一性与重复性较差、基质效应较高的技术问题。

    一种调控烟草西柏三烯二醇积累的MYB转录因子、编码基因及应用

    公开(公告)号:CN111548399B

    公开(公告)日:2022-02-08

    申请号:CN202010411589.X

    申请日:2020-05-15

    摘要: 本发明属于生物技术领域,尤其涉及一种调控烟草西柏三烯二醇积累的MYB转录因子、编码基因及应用。本发明通过实时荧光定量PCR技术检测NtMYB306a的表达特性,NtMYB306a在烟草各个组织中均有表达,尤其在烟草腺毛中优势表达。在栽培烟草中过表达NtMYB306a基因,结果发现,烟草类西柏烷代谢途径中的二个关键酶基因CBT、CYP71D16表达量明显增加,NtMYB306a基因过表达株系西柏三烯二醇含量显著高于对照组,这表明NtMYB306a参与烟草类西柏烷代谢的生物合成调控,同时积累西柏三烯二醇。本发明为阐述烟草类西柏烷生物合成的分子调控机制及种质改良提供了理论依据及应用基础。

    一种同时分析卷烟主流烟气中39种酚的色谱检测方法

    公开(公告)号:CN108548881B

    公开(公告)日:2021-04-13

    申请号:CN201810359955.4

    申请日:2018-04-20

    IPC分类号: G01N30/02 G01N30/72

    摘要: 本发明公开了一种同时分析卷烟主流烟气中39种酚的色谱检测方法,包括以下步骤:(1)卷烟主流烟气的捕集;(2)卷烟主流烟气样品中酚的提取;(3)酚的衍生化;(4)酚的萃取与富集;(5)用气相色谱‑质谱检测器对酚进行分析检测;本发明建立了超声提取,乙酰衍生化结合微萃取提取技术,气相色谱‑质谱同时定性与定量主流烟气中39种酚的方法,具有简单、快速、高灵敏度、分离能力强及稳定性好的特点,可以有效提高样品检测的数据准确性。