一种快速构建差异表达基因文库的方法

    公开(公告)号:CN103114086B

    公开(公告)日:2014-09-10

    申请号:CN201310052404.0

    申请日:2013-02-18

    IPC分类号: C12N15/10 C40B50/06 C40B40/08

    摘要: 本发明公开了一种快速构建差异表达基因文库的方法,包括如下步骤:先提取感染鹅细小病毒和未感染鹅细小病毒鹅法氏囊的总mRNA;利用获得的mRNA合成双链cDNA进行酶切消化,然后分为2管,分别添加不同的接头进行连接;将加有接头的双链cDNA先进行正向消减杂交,然后将正向消减杂交产物进行反向消减杂交,反向消减杂交后再进行第一次PCR扩增,将扩增产物稀释后,以稀释液为模板进行第2次PCR扩增;最后将第2次PCR扩增的产物进行变性梯度凝胶电泳,电泳后进行染色,得鹅细小病毒胁迫法氏囊的差异表达基因文库;利用本发明的方法构建的基因文库无假阳性,并且具有速度快、灵敏度高、特异性强、成本低廉,操作方便等特点。

    一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法

    公开(公告)号:CN102851277B

    公开(公告)日:2014-01-08

    申请号:CN201210330081.2

    申请日:2012-09-07

    IPC分类号: C12N15/10

    摘要: 本发明属于动物医学领域,特别涉及动物粪便中DNA的提取方法,具体为:将肉鸭粪样用缓冲液浸泡并震荡均匀,去除杂质,收集沉淀物I,加入缓冲液,离心并去除上清液,离心处理至上清液无异色,得沉淀物II;在沉淀物II中加入蒸馏水,重悬并离心,取上清液II,加入蛋白酶K和EDTA混合液振荡混匀水浴;离心,弃上清液,得沉淀III;在沉淀III中加裂解液和EDTA的混合液,并在低温下使DNA复性;离心取上清液III,所述上清液III中含有总DNA;本发明所得的DNA片段较完整、大小约为500bp,浓度、纯度、得率高,所得DNA可直接作为PCR扩增的模板,以及粪便微生态学等方面的研究。本发明简单方便,产量、得率和浓度及纯度高且价格便宜。