表达ORFVF1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法

    公开(公告)号:CN115960845A

    公开(公告)日:2023-04-14

    申请号:CN202211293210.5

    申请日:2022-10-21

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法。该病毒构建方法如下:(1)根据山羊痘病毒基因组序列、羊口疮病毒F1L基因开放阅读框序列,以135基因编码区两侧区域DNA片段为左右重组臂,中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区以及标记基因gpt、EGFP、早晚期启动子,并且含有loxp位点,构建同源重组供体质粒;(2)利用步骤(1)所得同源重组供体质粒转染细胞,制得表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒。本发明提供的重组山羊痘病毒不影响山羊痘病毒的体外复制能力,该重组山羊痘病毒所插入的F1L外源基因在机体内随载体病毒的复制而表达,可作为羊痘、羊口疮弱毒疫苗的新方案。

    一种快速构建差异表达基因文库的方法

    公开(公告)号:CN103114086B

    公开(公告)日:2014-09-10

    申请号:CN201310052404.0

    申请日:2013-02-18

    Abstract: 本发明公开了一种快速构建差异表达基因文库的方法,包括如下步骤:先提取感染鹅细小病毒和未感染鹅细小病毒鹅法氏囊的总mRNA;利用获得的mRNA合成双链cDNA进行酶切消化,然后分为2管,分别添加不同的接头进行连接;将加有接头的双链cDNA先进行正向消减杂交,然后将正向消减杂交产物进行反向消减杂交,反向消减杂交后再进行第一次PCR扩增,将扩增产物稀释后,以稀释液为模板进行第2次PCR扩增;最后将第2次PCR扩增的产物进行变性梯度凝胶电泳,电泳后进行染色,得鹅细小病毒胁迫法氏囊的差异表达基因文库;利用本发明的方法构建的基因文库无假阳性,并且具有速度快、灵敏度高、特异性强、成本低廉,操作方便等特点。

    一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法

    公开(公告)号:CN102851277B

    公开(公告)日:2014-01-08

    申请号:CN201210330081.2

    申请日:2012-09-07

    Abstract: 本发明属于动物医学领域,特别涉及动物粪便中DNA的提取方法,具体为:将肉鸭粪样用缓冲液浸泡并震荡均匀,去除杂质,收集沉淀物I,加入缓冲液,离心并去除上清液,离心处理至上清液无异色,得沉淀物II;在沉淀物II中加入蒸馏水,重悬并离心,取上清液II,加入蛋白酶K和EDTA混合液振荡混匀水浴;离心,弃上清液,得沉淀III;在沉淀III中加裂解液和EDTA的混合液,并在低温下使DNA复性;离心取上清液III,所述上清液III中含有总DNA;本发明所得的DNA片段较完整、大小约为500bp,浓度、纯度、得率高,所得DNA可直接作为PCR扩增的模板,以及粪便微生态学等方面的研究。本发明简单方便,产量、得率和浓度及纯度高且价格便宜。

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