公开(公告)号：CN113512767B

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN202110486484.5

申请日：2021-04-30

申请人： 天津诺禾致源生物信息科技有限公司

发明人： 李新 ,  马玉 ,  李瑞强 ,  赵桂仿

IPC分类号： C40B80/00 ,  C40B50/06 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/6806

摘要： 本发明公开了一种用于构建small RNA文库的接头、试剂盒及small RNA文库的构建方法。其中，该接头包括3’端接头，3’端接头为SEQ ID NO：1所示的随机末端接头，其中，N表示随机碱基；3’端接头的5’末端连接一个rApp，3’末端连接一个封闭基团，5’末端的第二位碱基修饰有MP。进一步地，接头还包括5’端接头，5’端接头为SEQ ID NO：2所示的末端接头，5’端接头的3’末端具有2’OMe修饰。应用本发明的技术方案，3’端接头的MP修饰和5’端接头的2’OMe修饰，能够有效的防止3’端接头和5’端接头连接，提高接头连接效率，降低建库的起始量。

公开(公告)号：CN112795990A

公开(公告)日：2021-05-14

申请号：CN201911112475.9

申请日：2019-11-14

申请人： 广州华大基因医学检验所有限公司 ,  深圳华大基因股份有限公司 ,  深圳华大临床检验中心

发明人： 李英镇 ,  徐祖元 ,  吴红龙

IPC分类号： C40B80/00 ,  C40B50/06 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/10 ,  G16B20/50

摘要： 本发明公开了一种灵活多变的降低污染及PCR偏倚的多标签二代测序文库接头。本发明提供了接头，由DNA单链A(5’端到3’端依次为前导区、随机标签、固定区、标签1和引物1结合区)和DNA单链B(5’端到3’端依次为固定区1、引物2结合区、固定区2、标签2和前导区)退火形成。本发明能为二代测序的DNA文库加入多个标签序列，大大提高样本间的分辨率。同时能为每个插入片段加入唯一序列，可识别原始插入片段及PCR复制子。因此本发明能解决病原微生物筛查中由于单标签污染导致的假阳性以及突变检测中的由于PCR扩增导致的突变比例偏移。所有本发明在病原微生物检测、肿瘤基因检测、单基因病检测等领域均具有较大的应用价值。

公开(公告)号：CN109576347B

公开(公告)日：2021-03-12

申请号：CN201811483755.6

申请日：2018-12-06

申请人： 深圳海普洛斯医疗器械有限公司

发明人： 张晓妮 ,  许明炎 ,  方文 ,  屈宏越

IPC分类号： C12Q1/6806 ,  C12N15/10 ,  C12N15/11 ,  C40B50/06 ,  C40B80/00

摘要： 本发明提供了一种含单分子标签的测序接头和测序文库的构建方法，该接头通过第一核苷酸单链与第二核苷酸单链部分结合而形成，其中，第一核苷酸单链包括单分子标签和第一测序引物序列，并且第二核苷酸单链包括样本标签、以及与第一测序引物序列部分互补的第二测序引物序列。在本发明中，在测序的生物信息学分析中，能够通过DNA片段比对到参考基因组上的位置和单分子标签识别重复的DNA片段，并且将重复的DNA片段进行对比以识别真正的基因变异，从而能够提高测序的准确性。

公开(公告)号：CN107075512B

公开(公告)日：2021-01-15

申请号：CN201480081517.6

申请日：2014-10-14

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 江媛 ,  赵霞 ,  耿春雨 ,  傅书锦 ,  贺玲瑜 ,  苏小珊 ,  吴凡子 ,  李雅乔 ,  章文蔚 ,  蒋慧 ,  阿莱克谢耶夫安德烈 ,  徳马纳克拉多杰

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C40B40/06 ,  C40B80/00

摘要： 提供了一种接头元件和使用该接头元件构建测序文库的方法，所述接头元件由接头A和接头B组成；接头A由一条核酸长链与一条核酸短链互补配对而成，长链5’端具有磷酸修饰，短链3’端为封闭修饰，短链中具有酶作用位点；接头B为一条核酸单链，其3’端能与接头A长链5’端互补配对；所述接头A的长链和接头B中具有II型限制性内切酶识别位点。使用本发明的接头元件构建测序文库时，在保证接头连接方向性的同时，解决了片段互连、接头自连、连接效率低的问题，减少了步骤间的纯化反应，缩短了连接时间，降低了成本。

公开(公告)号：CN111041026A

公开(公告)日：2020-04-21

申请号：CN201911371292.9

申请日：2019-12-26

申请人： 北京优迅医学检验实验室有限公司

发明人： 孙广欣 ,  杨飘 ,  石露 ,  王冬 ,  伍启熹 ,  王建伟 ,  刘倩 ,  唐宇

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B80/00

摘要： 本发明涉及高通量测序技术领域，具体涉及一种高通量测序用核酸接头和文库构建方法。本发明的核酸接头包括接头1和接头2，所述接头1为双链不等长寡核苷酸，包括长链和短链，所述长链的5’端为磷酸化修饰，所述长链的3’端和所述短链的3’端为能够阻断3’磷酸二酯键形成的修饰；所述接头2为单链寡核苷酸；所述接头2包含与所述接头1的长链5’端的互补区。该接头可有效减少接头自连的发生，实现了在接头连接后无需纯化可直接进行PCR扩增，构建的文库无明显的接头二聚体污染，有效降低了DNA样本的损失，提高了文库构建的效率和质量。

公开(公告)号：CN108300716A

公开(公告)日：2018-07-20

申请号：CN201810013177.3

申请日：2018-01-05

申请人： 武汉康测科技有限公司

发明人： 吴启家 ,  王洋 ,  周宇

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B80/00 ,  C12Q1/6806

摘要： 本发明公开了一种接头元件、其应用和基于不对称多重PCR进行靶向测序文库构建的方法。其中，该接头元件由第一核苷酸链S和第二核苷酸链AS退火形成的DNA双链，包括第一通用序列区、链分子标签区以及随机分子标签序列区，其中第一通用序列区和随机分子标签序列区为Watson-Crick碱基配对区，链分子标签区为碱基不配对或非Watson-Crick配对区，其中第一核苷酸链S 3’末端悬T，第二核苷酸链AS 5’末端磷酸化修饰。应用本发明的接头元件(又称为接头)，可以完全去除扩增和测序错误，从而对样品中的低频核酸变异(包括取代、插入、缺失、融合和拷贝数变异)进行高灵敏的检测。

公开(公告)号：CN108300716B

公开(公告)日：2020-06-30

申请号：CN201810013177.3

申请日：2018-01-05

申请人： 武汉康测科技有限公司

发明人： 吴启家 ,  王洋 ,  周宇

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B80/00 ,  C12Q1/6806

摘要： 本发明公开了一种接头元件、其应用和基于不对称多重PCR进行靶向测序文库构建的方法。其中，该接头元件由第一核苷酸链S和第二核苷酸链AS退火形成的DNA双链，包括第一通用序列区、链分子标签区以及随机分子标签序列区，其中第一通用序列区和随机分子标签序列区为Watson‑Crick碱基配对区，链分子标签区为碱基不配对或非Watson‑Crick配对区，其中第一核苷酸链S 3’末端悬T，第二核苷酸链AS 5’末端磷酸化修饰。应用本发明的接头元件(又称为接头)，可以完全去除扩增和测序错误，从而对样品中的低频核酸变异(包括取代、插入、缺失、融合和拷贝数变异)进行高灵敏的检测。

公开(公告)号：CN111118001A

公开(公告)日：2020-05-08

申请号：CN201911424939.X

申请日：2019-12-31

申请人： 苏州贝康医疗器械有限公司

发明人： 赵丁丁 ,  孔令印 ,  冒燕 ,  夏琴 ,  梁波

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C40B80/00

摘要： 本发明涉及一种多测序平台通用接头、适用于多测序平台的文库构建方法及试剂盒，基于多测序平台通用接头的设计及配套快速建库流程的开发，通过一步反应完成DNA片段化、末端修复和dA尾添加，然后在DNA片段两端连接上多测序平台通用接头，所构文库即可同时在多个测序平台上进行高通量测序。该法解决了因测序平台差异造成需多次构建不同测序平台文库的临床难题，大幅缩减了建库时长和成本，同时单次建库的低起始模板量需求也大大节约了临床样本的消耗。

公开(公告)号：CN110331187A

公开(公告)日：2019-10-15

申请号：CN201910741578.5

申请日：2019-08-12

申请人： 天津华大医学检验所有限公司 ,  深圳华大基因股份有限公司

发明人： 宋炎 ,  张娜 ,  刘玉朋 ,  邵林

IPC分类号： C12Q1/6806 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B70/00 ,  C40B80/00

摘要： 本发明涉及基因测序领域，具体涉及一种组合标签、组合标签接头及其应用。该组合标签包括至少两组标签，所述至少两组标签的每一组含有至少两个标签序列，所述至少两组标签的每一组内任意标签序列间的汉明距离大于等于2，所述至少两组标签的每一组间任意标签序列间的汉明距离大于等于1。该组合标签接头含有接头序列和该组合标签。应用该组合标签或者该组合标签接头进行基因文库的构建、测序等，可以有效避免样本间的污染，提升测序深度。

公开(公告)号：CN109797197A

公开(公告)日：2019-05-24

申请号：CN201910110142.6

申请日：2019-02-11

申请人： 杭州纽安津生物科技有限公司

发明人： 林志伟 ,  莫凡 ,  罗凯 ,  郑文渊 ,  韩宁 ,  陈枢青

IPC分类号： C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12N15/11 ,  C12N15/10 ,  C40B80/00 ,  C12Q1/6886

摘要： 本发明公开了一种单链分子标签接头及单链DNA建库方法及其在检测循环肿瘤DNA中应用，单链分子标签接头，包括：14个碱基配对形成的茎结构、测序引物序列、和8个随机核苷酸组成的分子标签序列，其中测序引物序列与茎结构序列之间插入了一位碱基“U”，该单链核酸序列经退火变性会形成茎环结构；本发明通过单链DNA建库，解决现有检测技术中对液态活检特别是ctDNA片段短、浓度低、碎片化、灵敏度低技术问题；实现准确辨别基因组坐标始末位点相同的测序reads是来自同一还是多个原始细胞释放出来的cfDNA，并将来源于同一个细胞的原始正负链的测序reads配对起来分析的目的，从而降低测序的重复劳动，提高对假阳性突变的分辨率。