一种内源提取耻垢分枝杆菌蛋白质纳米笼的方法

    公开(公告)号:CN118703547A

    公开(公告)日:2024-09-27

    申请号:CN202410865668.6

    申请日:2024-07-01

    申请人: 南开大学

    发明人: 贡红日 赵梓晴

    摘要: 本发明提供了一种内源提取耻垢分枝杆菌蛋白质纳米笼的方法,属于蛋白提取纯化技术领域。本发明提供的方法包括以下步骤:在耻垢分枝杆菌中导入含有CFP29基因及1×Flag亲和标签的重组质粒,得到耻垢分枝杆菌重组菌;提取所述耻垢分枝杆菌重组菌的总蛋白溶液,将所述耻垢分枝杆菌总蛋白溶液进行Flag标签亲和柱层析纯化,得到耻垢分枝杆菌蛋白质纳米笼粗提液;将所述耻垢分枝杆菌蛋白质纳米笼粗提液通过凝胶排阻色谱法纯化,得到耻垢分枝杆菌蛋白质纳米笼纯品。本发明提供的提取纯化方法操作简单、方便易行,获得的耻垢分枝杆菌本底蛋白质纳米笼产量更大、纯度更高且性质稳定。

    一种生产四氢嘧啶的菌株及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN117965590B

    公开(公告)日:2024-09-17

    申请号:CN202410074682.4

    申请日:2024-01-18

    摘要: 本发明提供了一种生产四氢嘧啶的菌株及其构建方法和应用。所述构建方法包括如下步骤:S1:敲除盐单胞菌内源丙酮酸脱氢酶基因序列;S2:在S1盐单胞菌中插入acs、ectA‑ectB‑ectC、asd‑lysC基因序列;所述acs、ectA‑ectB‑ectC、asd‑lysC基因序列由体外扩增得到。本发明的重组工程菌经过乙酸钠代谢强化,在发酵时能高效地利用乙酸钠作为碳源进行生长及产物合成,实现高产四氢嘧啶的效果。生产过程中无需额外添加抗生素和诱导剂,极大降低生产成本,提高单批次发酵收益,有利于工业化大规模生产。

    一种嗜水气单胞菌pspC基因突变株的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN118638835A

    公开(公告)日:2024-09-13

    申请号:CN202410925263.7

    申请日:2024-07-11

    摘要: 本发明公开了一种嗜水气单胞菌pspC基因突变株的制备方法及应用,属于微生物技术领域,S1、提取嗜水气单胞菌全基因组,构建pspC基因敲除所使用的引物;S2、以所提取的嗜水气单胞菌全基因组为模板,使用引物进行目的基因上下游同源臂扩增和重叠延伸,得到缺失后的pspC基因片段;S3、缺失后的pspC基因片段导入自杀质粒pRE112,得到重组质粒pRE112‑ΔpspC;S4、将重组质粒pRE112‑ΔpspC转入E.coli sm10λ感受态细胞,通过接合转移构建同源重组突变株,再通过蔗糖压力筛选,得到所述嗜水气单胞菌突变株ΔpspC。本发明通过分子克隆技术、Overlap PCR技术和同源重组技术,利用自杀载体对嗜水气单胞菌pspC基因进行框内缺失突变,获得基因缺失的,且能稳定遗传的嗜水气单胞菌突变菌ΔpspC。