摘要:
Die Erfindung betrifft ein Mikroskop (1) umfassend ein zur Erzeugung eines Lichtblatts (6) ausgebildetes Beleuchtungsobjektiv (2) mit einer ersten optischen Achse (A1) und ein zur Detektion von aus der Probenebene (4) kommenden Lichts ausgebildetes Detektionsobjektiv (3) mit einer zweiten optischen Achse (A2). Das Beleuchtungsobjektiv (2) und das Detektionsobjektiv (3) sind derart zueinander und zur Probenebene (4) ausgerichtet, dass sich die erste optische Achse (A1) und die zweite optische Achse (A2) in der Probenebene (4) schneiden und miteinander einen im Wesentlichen rechten Winkel einschließen. Die optischen Achsen (A1, A2) schließen mit einer orthogonal zur Probenebene (4) gerichteten Bezugsachse (B) jeweils einen von Null verschiedenen Winkel ein. Ferner ist eine zur Weitfeld-Beleuchtung der Probenebene (4) ausgebildete Übersichtsbeleuchtungsvorrichtung aufweisend eine Beleuchtungsoptik (9) mit einer dritten optischen Achse (A3) vorhanden. Kennzeichnend ist, dass das Detektionsobjektiv (3) zur Detektion sowohl von Licht des Lichtblatts (6) als auch von Licht der Beleuchtungsoptik (9) vorgesehen und ausgebildet ist. Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zum Betreiben eines Lichtblattmikroskops.
摘要:
The invention relates to a method for examining a specimen (1) by means of light sheet microscopy, wherein a plurality of illumination wavelengths is selected, of which examination light for the specimen (1) is composed. For a center wavelength, the modulation depth of a phase-selective element is set at π. A specified phase distribution is applied to the phase-selective element, and a specified aperture structure is applied to an aperture (24) in the aperture plane, which specified aperture structure makes it possible to compose the illumination light of a plurality of illumination wavelengths and thus to illuminate the specimen (1) by means of a light sheet composed of a plurality of colors. For this purpose, a preferred wavelength is selected and, for a light sheet of specified form, the electric field of said light sheet is determined in the focal plane of the illumination objective (10) by means of light of the preferred wavelength. The phase distribution to be specified is calculated therefrom. The phase-selective element is illuminated by means of illumination light and the illumination light is structured by the phase-selective element. The structured illumination light is imaged into an aperture plane and the zeroth orders of the multi-colored, structured light are removed, such that a structured light sheet is formed in a focal plane of an illumination objective (10) arranged downstream, said light sheet having a light sheet plane that lies perpendicular to the focal plane of the illumination objective (10). The specimen (1) is illuminated by means of the structured light sheet in the light sheet plane and light emitted by the specimen is detected in a detection direction that includes an angle with the light sheet plane, which angle is different from zero.
摘要:
Die Erfindung betrifft ein Mikroskop (1) umfassend ein zur Erzeugung eines Lichtblatts (6) ausgebildetes Beleuchtungsobjektiv (2) mit einer ersten optischen Achse (A1) und ein zur Detektion von aus der Probenebene (4) kommenden Lichts ausgebildetes Detektionsobjektiv (3) mit einer zweiten optischen Achse (A2). Das Beleuchtungsobjektiv (2) und das Detektionsobjektiv (3) sind derart zueinander und zur Probenebene (4) ausgerichtet, dass sich die erste optische Achse (A1) und die zweite optische Achse (A2) in der Probenebene (4) schneiden und miteinander einen im Wesentlichen rechten Winkel einschließen. Die optischen Achsen (A1, A2) schließen mit einer orthogonal zur Probenebene (4) gerichteten Bezugsachse (B) jeweils einen von Null verschiedenen Winkel ein. Ferner ist eine zur Weitfeld-Beleuchtung der Probenebene (4) ausgebildete Übersichtsbeleuchtungsvorrichtung aufweisend eine Beleuchtungsoptik (9) mit einer dritten optischen Achse (A3) vorhanden. Kennzeichnend ist, dass das Detektionsobjektiv (3) zur Detektion sowohl von Licht des Lichtblatts (6) als auch von Licht der Beleuchtungsoptik (9) vorgesehen und ausgebildet ist. Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zum Betreiben eines Lichtblattmikroskops.
摘要:
The invention relates to a device and to a method for imaging a sample (2) arranged in an object plane (1). Such a device comprises an optical transmission system (3), which images a region of the sample (2) from the object plane (1) into an intermediate image plane (4). The object plane (1) and the intermediate image plane (4) together with an optical axis (5) of the transmission system (3) enclose an angle different from 90°. The optical transmission system (3) is constructed of a plurality of lenses. The device additionally comprises an optical imaging system (6), which has a lens, the optical axis (7) of which is perpendicular to the intermediate image plane (4) and which is focused at the intermediate image plane (4) such that the object plane (1) can be imaged onto a detector (8) without distortion. Finally, the device also comprises an illuminating apparatus (10) for illuminating the sample (2) by means of a light sheet (11), wherein the light sheet (11) lies substantially in the object plane (1) and defines an illumination direction, and wherein the normal of the object plane (1) defines a detection direction. In the case of such a device, the object plane (1) encloses an angle together with the optical axis (5) of the transmission system (3), the magnitude of which angle is less than the opening angle of an object-side detection aperture cone (12) of the transmission system (3), and the object plane (1) lies at least partially within the object-side detection aperture cone (12). In addition, the intermediate image plane (4) encloses an angle together with the optical axis (5) of the transmission system (3), the magnitude of which angle is less than the opening angle of an intermediate-image-side detection aperture cone (13) of the transmission system (3), and the intermediate image plane (4) lies at least partially within the intermediate-image-side detection aperture cone (13).
摘要:
The invention relates to a method for preparing for and carrying out the microscopic recording of image stacks of a sample (2) from various orientation angles, wherein the sample (2) is retained in a sample retainer (3) and the sample retainer (3) defines a sample coordinate system. The sample retainer (3) itself can be translated and rotated in a space spanned by a detection coordinate system. In a first embodiment, for at least two different orientation angles (α, α 2), a projection image is recorded in the detection coordinate system and a first sample volume (V) and a second sample volume (V 2) are determined in the sample coordinate system. Then the intersection volume of said two sample volumes is determined in the sample coordinate system. The parameters necessary for image stack recording are determined in the sample coordinate system for all other orientation angles on the basis of the intersection volume. Alternatively to determining an intersection volume, a sample volume (V P) can also be defined by determining start and end parameters for image stack recording for an orientation angle. The sample (2) is then positioned in the detection coordinate system accordingly and the image stack recording is carried out. A conversion between the sample coordinate system and the detection coordinate system is carried out by means of corresponding transformation matrices.