公开(公告)号：US5358862A

公开(公告)日：1994-10-25

申请号：US914212

申请日：1992-07-14

申请人： Boyd Hardesty ,  Wendy L. Picking

发明人： Boyd Hardesty ,  Wendy L. Picking

IPC分类号： C12N15/09 ,  C07H21/04 ,  C12N15/10 ,  C12N15/11

CPC分类号： C12N15/10

摘要： Synthetic tRNAs are produced from tRNA.sup.Cys (AAA), tRNA.sup.Ser (AAA), tRNA.sub.e.sup.Ala (AAA), and tRNA.sub.i.sup.Ala (AAA) genes. Polyuridylic acid-dependent syntheses of polypeptides were carried out in vitro on E. coli ribosomes using the synthetic tRNAs.

摘要翻译： 合成tRNA由tRNACys（AAA），tRNASer（AAA），tRNAeAla（AAA）和tRNAiAla（AAA）基因产生。 使用合成的tRNA在体外在大肠杆菌核糖体上进行多肽的多聚尿酸依赖性合成。

公开(公告)号：US06448033B1

公开(公告)日：2002-09-10

申请号：US08590729

申请日：1996-01-24

申请人： Wieslaw Kudlicki ,  Gisela Kramer ,  Boyd Hardesty

发明人： Wieslaw Kudlicki ,  Gisela Kramer ,  Boyd Hardesty

IPC分类号： C12P2106

CPC分类号： C07K1/1077 ,  C12N9/10 ,  C12P21/02 ,  G01N33/533

摘要： The present invention provides a method of synthesizing a fluorescently labeled protein in a cell free protein synthesis system, comprising the steps of: (a) incubating a sample of ribosomes obtained from a cell-free extract with plasmid DNA containing a coding sequence for a protein of interest, said sample incubated in a coupled transcription/translation medium together with a aminoacyl tRNA having fluorescent label; (b) partially purifying said fluorescently labeled protein by separating newly synthesized, fluorescently-labeled protein from other fluorescent components within said sample; (c) measuring the amount of protein synthesized; (d) determining fluorescence of newly synthesized protein; and (e) determining the biological activity of the newly synthesized protein.

摘要翻译： 本发明提供了一种在无细胞蛋白质合成系统中合成荧光标记的蛋白质的方法，包括以下步骤：（a）将从无细胞提取物获得的核糖体样品与含有蛋白质编码序列的质粒DNA 所述样品与偶联的转录/翻译培养基一起孵育，同时具有荧光标记的氨酰基tRNA; （b）通过将新合成的荧光标记的蛋白质与所述样品中的其他荧光成分分离，部分纯化所述荧光标记的蛋白质; （c）测量合成的蛋白质的量; （d）确定新合成的蛋白质的荧光; 和（e）确定新合成的蛋白质的生物活性。