公开(公告)号：US06187574B1

公开(公告)日：2001-02-13

申请号：US08973914

申请日：1998-04-28

申请人： Jose Luis Garcia Lopez ,  Estrella Cortes Rubio ,  Jorge Alonso Palacios ,  Jose Luis Barredo Fuente ,  Bruno Diez Garcia ,  Miguel Angel Moreno Valle ,  Carmen Schleissner Sanchez ,  Alfonso Collados de la Vieja ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

发明人： Jose Luis Garcia Lopez ,  Estrella Cortes Rubio ,  Jorge Alonso Palacios ,  Jose Luis Barredo Fuente ,  Bruno Diez Garcia ,  Miguel Angel Moreno Valle ,  Carmen Schleissner Sanchez ,  Alfonso Collados de la Vieja ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

IPC分类号： C12N902

CPC分类号： C12N9/0024

摘要： Process for producing the enzyme D-amino acid oxydase of Rhodotorula gracilis in host cells. The process for the expression of the enzyme comprises isolating the complementary DNA corresponding to the messager RNA of the gene which codes for the D-amino acid oxydase of any strain of Rhodotorula gracillis producing said enzyme; fusing the fragment of DNA which codes for D-amino acid oxydase of Rhodotorula gracillis with a DNA sequence which contains a site of union to the ribosome and a high efficiency promoter sequence for the express of genes in host cells; inserting the DNA fragment into a plasmid appropriate for the host cell; cultivating the host cells transformed with said plasmid; and collecting the enzyme.

摘要翻译： 在宿主细胞中生产细小红球菌的D-氨基酸氧化酶酶的方法。 表达酶的过程包括分离与编码产生所述酶的任何红曲霉菌株的D-氨基酸氧化酶的基因的信使RNA相对应的互补DNA; 将编码红景天细菌的D-氨基酸氧化酶的DNA片段与包含与核糖体结合的位点的DNA序列和用于在宿主细胞中表达基因的高效启动子序列融合; 将DNA片段插入适合宿主细胞的质粒中; 培养用所述质粒转化的宿主细胞; 并收集酶。

公开(公告)号：US06558921B1

公开(公告)日：2003-05-06

申请号：US09631022

申请日：2000-08-02

申请人： Jose Luis Barredo Fuente ,  Marta Rodriguez Saiz ,  Alfonso J. Collados de la Vieja ,  Migeul Angel Moreno Valle ,  Francisco Salto Maldonado ,  Bruno Diez Garcia

发明人： Jose Luis Barredo Fuente ,  Marta Rodriguez Saiz ,  Alfonso J. Collados de la Vieja ,  Migeul Angel Moreno Valle ,  Francisco Salto Maldonado ,  Bruno Diez Garcia

IPC分类号： C12P102

CPC分类号： C12N15/1137 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/02 ,  C07K2319/036 ,  C12N9/0016 ,  C12N9/2402 ,  C12N15/625 ,  C12N15/70 ,  C12N15/80 ,  C12Y104/01002 ,  C12Y302/01052

摘要： An isolated DNA having the promoter sequence of the hex gene of P. chrysogenum or a DNA fragment that is hybridizable to the complement of the promoter sequence under stringent conditions and is capable of directing expression of DNA downstream of the fragment in P. chrysogenum. Also a process for promoting expression of a coding sequence of interest in a microorganism using the isolated DNA and a process to block expression of a gene of interest in a microorganism using the isolated DNA are disclosed.

摘要翻译： 一种分离的DNA，其具有产黄青霉六方基因的启动子序列或在严格条件下可与启动子序列的互补体杂交的DNA片段，并且能够引导产生产黄青霉的片段下游的DNA的表达。 还公开了使用分离的DNA促进微生物中感兴趣的编码序列的表达的方法和使用分离的DNA阻断微生物中目的基因表达的过程。

公开(公告)号：US06300095B1

公开(公告)日：2001-10-09

申请号：US09171337

申请日：1999-05-14

申请人： Jose Luis Barredo Fuente ,  Marta Rodriguez Saiz ,  Alfonso J. Collados De La Vieja ,  Migeul Angel Moreno Valle ,  Francisco Salto Maldonado ,  Bruno Diez Garcia

发明人： Jose Luis Barredo Fuente ,  Marta Rodriguez Saiz ,  Alfonso J. Collados De La Vieja ,  Migeul Angel Moreno Valle ,  Francisco Salto Maldonado ,  Bruno Diez Garcia

IPC分类号： C07K14385

CPC分类号： C12N15/1137 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/02 ,  C07K2319/036 ,  C12N9/0016 ,  C12N9/2402 ,  C12N15/625 ,  C12N15/70 ,  C12N15/80 ,  C12Y104/01002 ,  C12Y302/01052

摘要： The invention relates to promoters of the genes glutamate dehydrogenase, &bgr;-acetylhexosaminidase and &ggr;-actin and their use in systems of expression, secretion and anti-sense of filamentary fungi. The invention also relates to the use of the promoters of the genes which code: (I) glutamate dehydrogenase NADP depending (EC.1.4.1.4) of Penicillium chrysogenum, (II) &ggr;-N-actylhexosaminidase (EC.3.2.1.52) of Penicillium chrysogenum and (III) &ggr;-actin of Penicillium chrysogenum and Acrimonium chrysogenum, which can be used for the construction of potent vectors of expression and secretion useful both for P. chrysogenum and for A. chrysogenum and related species. These promoters can also be used for blocking the genic expression through anti-sense construction. Under the control of the above mentioned promoters, it is possible to conduct the expression of other genes in filamentary fungi, thereby increasing the production of antibiotics and/or proteins inherent to the same.

摘要翻译： 本发明涉及谷氨酸脱氢酶，β-乙酰氨基己糖苷酶和γ-肌动蛋白基因的启动子及其在丝状真菌表达，分泌和反义系统中的用途。 本发明还涉及编码：（I）谷氨酸脱氢酶NADP依赖于产生产青青霉（EC.1.4.1.4），（II）γ-N-酰基六氨基甲酰氨基（EC.3.2.1.52）的基因的启动子的使用， 产黄青霉和（III）产黄青霉菌和产黄青霉素的γ-肌动蛋白，可用于构建有效的表达和分泌载体，可用于产黄青素和产黄青霉及相关物种。 这些启动子也可用于通过反义结构阻断基因表达。 在上述启动子的控制下，可以在丝状真菌中进行其他基因的表达，从而增加其固有的抗生素和/或蛋白质的产生。

公开(公告)号：US6110699A

公开(公告)日：2000-08-29

申请号：US952311

申请日：1998-02-25

申请人： Manuel Oliver Ruiz ,  Nieves Fraile Yecora ,  Emiliano Gonzalez De Prado ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

发明人： Manuel Oliver Ruiz ,  Nieves Fraile Yecora ,  Emiliano Gonzalez De Prado ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

IPC分类号： B01D61/14 ,  C07D499/10 ,  C07D499/12 ,  C07D499/18 ,  C07D499/42 ,  C12P37/06 ,  C12P37/00

CPC分类号： C12P37/06 ,  B01D61/142

摘要： Alternative process for obtaining 6-aminopenicillanic acid. The process comprises replacing the stages of extraction with organic solvents and isolation and separation of the intermediate penicillin salt as a solid by a process of ultrafiltration of the culture broth in at least 2 successive stages. The first stage has a cut-off for molecular weights of 20,000 Dalton and the second, 2000 Dalton. Subsequent to the enzyme conversion stage the products from that stage are subjected to a series of anionic exchange chromatography steps. ##STR1##

摘要翻译： PCT No.PCT / ES97 / 00066 Sec。 371日期：1998年2月25日 102（e）1998年2月25日PCT 1997年3月14日PCT公布。 第WO97 / 35029号公报 日期1997年9月25日获得6-氨基青霉烷酸的替代方法。 该方法包括用有机溶剂代替萃取阶段，并通过培养液中至少2个连续阶段的超滤过程将中间青霉素盐作为固体进行分离和分离。 第一阶段的分子量为20,000道尔顿，第二级为2000道尔顿。 在酶转化阶段之后，对来自该阶段的产物进行一系列阴离子交换色谱步骤。

公开(公告)号：US06251655B1

公开(公告)日：2001-06-26

申请号：US08952457

申请日：1998-10-28

申请人： Baltasar Minambres Rodriguez ,  Honorina Martinez Blanco ,  Elias Rodriguez Olivera ,  Belen Garcia Alonso ,  Jose Manuel Fernandez Canon ,  Jose Luis Barredo Fuente ,  Bruno Diez Garcia ,  Carmen Schleissner Sanchez ,  Miguel Angel Moreno Valle ,  Francisco Salto Maldonado ,  Jose Maria Luengo Rodriguez

发明人： Baltasar Minambres Rodriguez ,  Honorina Martinez Blanco ,  Elias Rodriguez Olivera ,  Belen Garcia Alonso ,  Jose Manuel Fernandez Canon ,  Jose Luis Barredo Fuente ,  Bruno Diez Garcia ,  Carmen Schleissner Sanchez ,  Miguel Angel Moreno Valle ,  Francisco Salto Maldonado ,  Jose Maria Luengo Rodriguez

IPC分类号： C12N120

CPC分类号： C12N9/93 ,  C12N2310/111 ,  C12P37/02

摘要： An isolated DNA encoding phenyl acetyl-CoA-ligase and a process of increasing the production of penicillin G in a strain of Penicillium chrysogenum by transforming the strain with the isolated DNA. Also vectors and host organisms having the isolated DNA.

摘要翻译： 编码苯乙酰辅酶A连接酶的分离DNA和通过用分离的DNA转化菌株来增加产黄青霉菌株中青霉素G的产生的方法。 还有具有分离的DNA的载体和宿主生物体。

公开(公告)号：US6146871A

公开(公告)日：2000-11-14

申请号：US981321

申请日：1998-08-13

申请人： Jose Luis Garcia Lopez ,  Estrella Cortes Rubio ,  Jose Manuel Guisan Seijas ,  Jose Luis Barredo Fuente ,  Bruno Diez Garcia ,  Alfonso Collados de la Vieja ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

发明人： Jose Luis Garcia Lopez ,  Estrella Cortes Rubio ,  Jose Manuel Guisan Seijas ,  Jose Luis Barredo Fuente ,  Bruno Diez Garcia ,  Alfonso Collados de la Vieja ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

IPC分类号： C12N15/09 ,  C12N1/21 ,  C12N9/78 ,  C12N9/84 ,  C12N9/86 ,  C12N15/00 ,  C12N15/55 ,  C12P17/14 ,  C12R1/01 ,  C12R1/19 ,  C12N9/18 ,  C12N15/70

CPC分类号： C12N9/86 ,  C12N9/84 ,  C07K2319/00

摘要： A procedure for producing a modified 7.beta.-(4-carboxybutanamide) cephalosporinase enzyme which can be purified in a single chromatographic step. The procedure for production of the enzyme involves: mutagenizing the gene which codes for the enzyme from Acinetobacter sp. ATCC 53891 by inserting a nucleotide sequence coding for six histidine residues; fusing the mutant gene with high-efficiency promoter DNA sequences; transforming Escherichia coli cells with the fusion gene construct; growing the transformed Escherichia coli cells; and recovering the enzyme by the use of supports which contain metal chelates. 7-Aminocephalosporanic acid is an important intermediate for the manufacture of a wide range of antibacterial agents of the cephalosporin family.

摘要翻译： PCT No.PCT / ES97 / 00098 Sec。 371日期1998年8月13日 102（e）日期1998年8月13日PCT 1997年4月18日PCT PCT。 公开号WO97 / 40175 PCT 日期1997年10月30日制备修饰的7β-（4-羧基丁酰胺）头孢菌素酶的方法，其可以在单个色谱步骤中纯化。 酶的制备方法包括：从不动杆菌属（Acinetobacter sp。）中诱变编码酶的基因。 ATCC 53891通过插入编码六个组氨酸残基的核苷酸序列; 将突变基因与高效启动子DNA序列融合; 用融合基因构建体转化大肠杆菌细胞; 生长转化的大肠杆菌细胞; 并通过使用含有金属螯合物的载体回收酶。 7-氨基头孢烷酸是制造头孢菌素类的广泛抗菌剂的重要中间体。

公开(公告)号：US06100393A

公开(公告)日：2000-08-08

申请号：US945890

申请日：1998-02-25

申请人： Juan Francisco Lopez Ortiz ,  Oscar Ferrero Barruego ,  Emiliano Gonzalez de Prado ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

发明人： Juan Francisco Lopez Ortiz ,  Oscar Ferrero Barruego ,  Emiliano Gonzalez de Prado ,  Alejandro Vitaller Alba ,  Francisco Salto Maldonado

IPC分类号： C07D501/10 ,  C07D501/12 ,  C07D501/22 ,  C12P35/02 ,  C07B63/00

CPC分类号： C12P35/02

摘要： Process for purifying 7-substituted aminodeacetoxycephalosporins through the use of filter membranes. A process for purification by ultrafiltration and/or nanofiltration with a cut-off for molecular weights over 10,000 Dalton and preferably over 2000 Dalton is described. For example cephalosporin-G of increased purity, represented by a 6-8% increase in the HPLC titre, with a reduction of 50% in absorbance, is obtained using this technique. The invention makes it possible for the purified products to be used directly in the synthesis of other antibiotic compounds without the need for intermediate isolation. ##STR1##

摘要翻译： PCT No.PCT / ES97 / 00065 Sec。 371日期：1998年2月25日 102（e）1998年2月25日PCT 1997年3月14日PCT公布。 第WO97 / 34902号公报 日期1997年9月25日通过使用过滤膜纯化7-取代氨基脱乙酰氧基头孢菌素的方法。 描述了通过超滤和/或纳滤的纯化方法，其具有超过10,000道尔顿，优选超过2000道尔顿的分子量的截止值。 使用该技术可以获得例如增加纯度的头孢菌素-G，以HPLC滴度增加6-8％，吸光度降低50％。 本发明使得纯化产物可以直接用于合成其它抗生素化合物而不需要中间分离。