公开(公告)号：US20050130178A1

公开(公告)日：2005-06-16

申请号：US10865683

申请日：2004-06-09

申请人： Caifu Chen ,  Michael Egholm ,  Lawrence Haff

发明人： Caifu Chen ,  Michael Egholm ,  Lawrence Haff

IPC分类号： G01N33/53 ,  C12N15/09 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/566 ,  C12P19/34

CPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q2561/101 ,  C12Q2527/113 ,  C12Q2527/107

摘要： An asynchronous thermal cycling protocol for nucleic acid amplification uses two primers with thermal melting temperatures different by about 10 to 30° C. After the higher melting primer has annealed and polymerase mediated extension, the uncopied, single-stranded target sequence may be hybridized and detected by a probe. DNA probes may be cleaved by the exonuclease activity of a polymerase. The probe may be a non-cleaving analog such as PNA. When a probe is labelled with a reporter dye and a quencher selected to undergo energy transfer, e.g. FRET, fluorescence from the reporter dye may be effectively quenched when the probe is unbound. Upon hybridization of the probe to complementary target or upon cleavage while bound to target, the reporter dye is no longer quenched, resulting in a detectable amount of fluorescence. The second, lower-melting primer may be annealed and extended to generate a double-stranded nucleic acid. Amplification may be monitored in real time, including each cycle, or at the end point. The asynchronous PCR thermal cycling protocol can generate a preponderance of the PCR amplicon in single-stranded form by repetition at the end of the protocol of annealing and extension of the higher melting primer.

摘要翻译： 用于核酸扩增的异步热循环方案使用两种引物，其热解温度不同于约10至30℃。在较高熔点引物退火和聚合酶介导的延伸之后，未接合的单链靶序列可能被杂交和检测 通过探针。 DNA探针可能被聚合酶的外切核酸酶活性切割。 探针可以是非断裂的类似物，例如PNA。 当探针用报告染料和选择进行能量转移的猝灭剂标记时，例如， 当探针未结合时，来自报告染料的荧光可以被有效地淬灭。 当探针与互补靶物杂交时或在与靶标结合时进行切割时，报道染料不再猝灭，导致可检测量的荧光。 可以将第二种较低熔点的引物退火并延伸以产生双链核酸。 可以实时监测放大，包括每个周期，或在终点。 异构PCR热循环方案可以在退火和延伸较高熔点引物的方案结束时通过重复生成单链形式的PCR扩增子的优势。

公开(公告)号：US20070154899A1

公开(公告)日：2007-07-05

申请号：US11441804

申请日：2006-05-26

申请人： James Coull ,  Andrew Stern ,  Lawrence Haff ,  Barbara Fox ,  Yumei Huang

发明人： James Coull ,  Andrew Stern ,  Lawrence Haff ,  Barbara Fox ,  Yumei Huang

IPC分类号： C12Q1/68 ,  G01N33/53

CPC分类号： G01N21/6486 ,  C12Q1/6818 ,  C12Q1/6823 ,  G01N33/532 ,  G01N33/58 ,  C12Q2565/501 ,  C12Q2523/101

摘要： The invention provides compositions and methods for the detection of biological targets, (e.g. nucleic acids and proteins) by nucleic acid templated chemistry, for example, by generating fluorescent, chemiluminescent and/or chromophoric signals.

摘要翻译： 本发明提供了通过核酸模板化学，例如通过产生荧光，化学发光和/或发色信号来检测生物学靶标（例如核酸和蛋白质）的组合物和方法。