公开(公告)号：US20110236900A1

公开(公告)日：2011-09-29

申请号：US13130993

申请日：2009-11-27

申请人： Yoshihide Hayashizaki ,  Masayoshi Itoh ,  Hajime Kanamori ,  Kengo Usui ,  Kazuhito Nomura

发明人： Yoshihide Hayashizaki ,  Masayoshi Itoh ,  Hajime Kanamori ,  Kengo Usui ,  Kazuhito Nomura

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C07K14/195 ,  C07H21/04 ,  C12N5/10 ,  C12P21/06 ,  C12N1/00

CPC分类号： C07K14/195 ,  G01N33/5308 ,  G01N2333/32

摘要： A method for determining the presence or absence of a mutation on the basis of the presence or absence of amplification with high reliability is provided. A target sequence including a target site contained in a sample nucleic acid is amplified using a primer that can hybridize to a region including the target site contained in the sample nucleic acid in the presence of a novel MutS having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, and then the presence or absence of a mutation at the target site is determined on the basis of the presence or absence of amplification. The novel MutS binds more specifically to a mismatched base pair than to a fully-matched base pair, whereby an extension reaction caused by a mismatch-binding primer is suppressed. Thus, according to the present invention, the presence or absence of a mutation can be determined with high reliability.

摘要翻译： 提供了一种基于高可靠性的扩增的存在或不存在来确定突变的存在或不存在的方法。 包含样品核酸中包含的靶位点的靶序列使用可以在含有氨基酸序列SEQ ID NO的新型MutS的存在下与包含在样品核酸中的靶位点的区域杂交的引物进行扩增 ：2，然后基于扩增的存在或不存在来确定靶位点处的突变的存在或不存在。 新的MutS更具体地结合失配的碱基对而不是完全匹配的碱基对，由此抑制由错配结合引物引起的延伸反应。 因此，根据本发明，可以高可靠性确定突变的存在或不存在。

公开(公告)号：US09518901B2

公开(公告)日：2016-12-13

申请号：US13807605

申请日：2012-06-28

申请人： Yoshihide Hayashizaki ,  Kengo Usui ,  Saori Goda ,  Kazuhito Nomura ,  Yuki Kawai

发明人： Yoshihide Hayashizaki ,  Kengo Usui ,  Saori Goda ,  Kazuhito Nomura ,  Yuki Kawai

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12P19/34 ,  C12P19/00 ,  C12P19/26 ,  C12P19/28 ,  C12P19/30 ,  G01N1/34 ,  C12N15/10

CPC分类号： G01N1/34 ,  C12N15/1003 ,  C12Q1/6806

摘要： The present invention is to provide a pretreatment method that allows RNA to be detected promptly and simply. RNA degradation activity due to lactoferrin present in the human rhinal mucosa is inhibited, for example, by adding iron ion and carbonate ion to a biological sample that contains the human rhinal mucosa. With the pretreated biological sample, an RNA virus gene can be amplified by a reverse transcriptase. Iron ion and carbonate ion can also inhibit reverse transcriptase inhibition due to lysozyme C contained in the human rhinal mucosa. Further, it is preferable to remove the envelope of the RNA virus by adding SDS to the biological sample that contains the human rhinal mucosa.

摘要翻译： 本发明提供一种能够及时且简单地检测RNA的预处理方法。 例如，通过将铁离子和碳酸根离子加入到含有人类鼻粘膜的生物样品中，可抑制由于存在于人类鼻粘膜中的乳铁蛋白引起的RNA降解活性。 通过预处理的生物样品，RNA病毒基因可以通过逆转录酶扩增。 铁离子和碳酸根离子也可以抑制人类鼻粘膜中包含的溶菌酶C的逆转录酶抑制。 此外，优选通过向包含人类鼻粘膜的生物样品中加入SDS来除去RNA病毒的包膜。

公开(公告)号：US20130302783A1

公开(公告)日：2013-11-14

申请号：US13807605

申请日：2012-06-28

申请人： Yoshihide Hayashizaki ,  Kengo Usui ,  Saori Goda ,  Kazuhito Nomura ,  Yuki Kawai

发明人： Yoshihide Hayashizaki ,  Kengo Usui ,  Saori Goda ,  Kazuhito Nomura ,  Yuki Kawai

IPC分类号： G01N1/34

CPC分类号： G01N1/34 ,  C12N15/1003 ,  C12Q1/6806

摘要： The present invention is to provide a pretreatment method that allows RNA to be detected promptly and simply. RNA degradation activity due to lactoferrin present in the human rhinal mucosa is inhibited, for example, by adding iron ion and carbonate ion to a biological sample that contains the human rhinal mucosa. With the pretreated biological sample, an RNA virus gene can be amplified by a reverse transcriptase. Iron ion and carbonate ion can also inhibit reverse transcriptase inhibition due to lysozyme C contained in the human rhinal mucosa. Further, it is preferable to remove the envelope of the RNA virus by adding SDS to the biological sample that contains the human rhinal mucosa.

摘要翻译： 本发明提供一种能够及时且简单地检测RNA的预处理方法。 例如，通过将铁离子和碳酸根离子加入到含有人类鼻粘膜的生物样品中，可抑制由于存在于人类鼻粘膜中的乳铁蛋白引起的RNA降解活性。 通过预处理的生物样品，RNA病毒基因可以通过逆转录酶扩增。 铁离子和碳酸根离子也可以抑制人类鼻粘膜中包含的溶菌酶C的逆转录酶抑制。 此外，优选通过向包含人类鼻粘膜的生物样品中加入SDS来除去RNA病毒的包膜。

公开(公告)号：US09586987B2

公开(公告)日：2017-03-07

申请号：US14343511

申请日：2012-09-07

申请人： Yoshihide Hayashizaki ,  Yasumasa Kimura ,  Kengo Usui ,  Yuki Tanaka ,  Yuki Kawai

发明人： Yoshihide Hayashizaki ,  Yasumasa Kimura ,  Kengo Usui ,  Yuki Tanaka ,  Yuki Kawai

IPC分类号： C12P19/34 ,  C07H21/04 ,  C12Q1/68

CPC分类号： C07H21/04 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6853 ,  C12Q2525/155 ,  C12Q2525/301 ,  C12Q2531/119 ,  C12Q2531/125 ,  C12Q2525/161 ,  C12Q2527/101

摘要： The present invention provides a primer set including primers that can be designed easily, with which an amplification distance can be shortened. Provided is a primer set for use in a method for isothermally amplifying a target nucleic acid sequence 4. The primer set includes a first primer 1F and a second primer 1R. The first primer 1F includes, on the 3′ side thereof, a sequence (A′) that can hybridize to a sequence (A) on the 3′ side of the target nucleic acid sequence. The second primer 1R includes, on the 3′ side thereof, a sequence (B′) that can hybridize to a sequence (B) on the 3′ side of either a strand extended from the first primer or a complementary strand of the target nucleic acid sequence 4. The first primer 1F and the second primer 1R include, on the 5′ sides thereof, sequences (C) that are substantially identical to each other.

摘要翻译： 本发明提供了可以容易地设计的引物，其可以缩短放大距离。 提供了用于等温扩增靶核酸序列4的方法中的引物组。引物组包括第一引物1F和第二引物1R。 第一引物1F在其3'侧包含可以与靶核酸序列的3'侧的序列（A）杂交的序列（A'）。 第二引物1R在其3'侧具有可以与从第一引物延伸的链的3'侧的序列（B）或靶核酸的互补链上的序列（B'）杂交的序列 酸序列4.第一引物1F和第二引物1R在其5'侧包括彼此基本相同的序列（C）。

公开(公告)号：US20140295447A1

公开(公告)日：2014-10-02

申请号：US14343511

申请日：2012-09-07

申请人： Yoshihide Hayashizaki ,  Yasumasa Kimura ,  Kengo Usui ,  Yuki Tanaka ,  Yuki Kawai

发明人： Yoshihide Hayashizaki ,  Yasumasa Kimura ,  Kengo Usui ,  Yuki Tanaka ,  Yuki Kawai

IPC分类号： C07H21/04 ,  C12Q1/68

CPC分类号： C07H21/04 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6853 ,  C12Q2525/155 ,  C12Q2525/301 ,  C12Q2531/119 ,  C12Q2531/125 ,  C12Q2525/161 ,  C12Q2527/101

摘要： The present invention provides a primer set including primers that can be designed easily, with which an amplification distance can be shortened. Provided is a primer set for use in a method for isothermally amplifying a target nucleic acid sequence 4. The primer set includes a first primer 1F and a second primer 1R. The first primer 1F includes, on the 3′ side thereof, a sequence (A′) that can hybridize to a sequence (A) on the 3′ side of the target nucleic acid sequence. The second primer 1R includes, on the 3′ side thereof, a sequence (B′) that can hybridize to a sequence (B) on the 3′ side of either a strand extended from the first primer or a complementary strand of the target nucleic acid sequence 4. The first primer 1F and the second primer 1R include, on the 5′ sides thereof, sequences (C) that are substantially identical to each other.

摘要翻译： 本发明提供了可以容易地设计的引物，其可以缩短放大距离。 提供了用于等温扩增靶核酸序列4的方法中的引物组。引物组包括第一引物1F和第二引物1R。 第一引物1F在其3'侧包含可以与靶核酸序列的3'侧的序列（A）杂交的序列（A'）。 第二引物1R在其3'侧具有可以与从第一引物延伸的链的3'侧的序列（B）或靶核酸的互补链上的序列（B'）杂交的序列 酸序列4.第一引物1F和第二引物1R在其5'侧包括彼此基本相同的序列（C）。