一种通过重构辅酶再生系统强化重组大肠杆菌催化合成胆绿素的方法

    公开(公告)号:CN114891710A

    公开(公告)日:2022-08-12

    申请号:CN202210604061.3

    申请日:2022-05-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种通过重构辅酶再生系统强化重组大肠杆菌催化合成胆绿素的方法,属于生物工程技术领域。本发明通过从Clostridium tetani中获得血红素加氧酶,以E.coliBL21(DE3)作为底盘细胞,pETDuet为表达载体构建重组大肠杆菌,实现该酶的表达。强化大肠杆菌中谷氨酸脱氢酶的表达,引入辅酶NADPH再生系统,成功构建重组菌株E.coliBL21/pETDuet‑gdhAEc‑hoCt,实现E.coli来源的GdhA和C.tetani来源的HO共表达。该重组菌在无需额外添加辅酶NADPH条件下,即可进行全细胞催化血红素合成胆绿素,转化率高达71.5%,为胆绿素的高效生产提供了新途径。

    一种用离子转运蛋白促进谷氨酸棒杆菌合成氨基酸的方法

    公开(公告)号:CN111718882B

    公开(公告)日:2022-06-10

    申请号:CN202010501734.3

    申请日:2020-06-04

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种用离子转运蛋白促进谷氨酸棒杆菌合成氨基酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明以L‑谷氨酸生产菌株谷氨酸棒杆菌G01和L‑精氨酸生产菌株钝齿棒杆菌SDNN403为出发菌株,在其中过表达功能性摄钾蛋白CglK和阳离子转运ATP酶CTAP,分别得到了生产L‑谷氨酸的重组菌GC‑K,和生产L‑精氨酸的重组菌CC‑K。使得L‑谷氨酸的产量较出发菌株提高了31.5%,使得L‑精氨酸的产量较原始菌株提高了36.1%。

    重组枯草芽孢杆菌及其在生产ε-聚赖氨酸中的应用

    公开(公告)号:CN111534474B

    公开(公告)日:2022-06-10

    申请号:CN202010237129.X

    申请日:2020-03-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了重组枯草芽孢杆菌及其在生产ε‑聚赖氨酸中的应用,属于生物技术领域。本发明提供了一种可高效转化L‑赖氨酸生产ε‑聚赖氨酸的重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5‑pls,将此重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5‑pls添加至含有L‑赖氨酸的反应体系中反应4h,即可使反应液中ε‑聚赖氨酸的产量以及转化率分别高达195.1mg/L和17.4%,因此,利用此重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/PMA5‑pls生产ε‑聚赖氨酸具有生产周期短、产量高的优势。

    一种利用重组谷氨酸棒杆菌发酵生产L-谷氨酸的方法

    公开(公告)号:CN111394291B

    公开(公告)日:2022-03-15

    申请号:CN202010227468.X

    申请日:2020-03-27

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌发酵生产L‑谷氨酸的方法,属于生物技术领域。本发明提供了一种可低产L‑丙氨酸、L‑酪氨酸、L‑缬氨酸、L‑胱氨酸和L‑甲硫氨酸等副产物的重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum G01/pXMJ19‑cg2115,将此菌株接种至5‑L发酵罐中发酵48h所获得的发酵液中L‑丙氨酸、L‑酪氨酸、L‑缬氨酸、L‑胱氨酸和L‑甲硫氨酸的含量分别仅有0.15g/L、0.185g/L、0.369g/L、0.02g/L和0.277g/L,分别较野生型谷氨酸棒杆菌G01降低了98.1%、96.1%、86.1%、99.4%和91.4%。

    一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN111676203B

    公开(公告)日:2022-02-01

    申请号:CN202010601081.6

    申请日:2020-06-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用,属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明提供了一种亮氨酸脱氢酶突变体,所述亮氨酸脱氢酶突变体与氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亮氨酸脱氢酶相比,第72位氨基酸由赖氨酸突变为了丙氨酸,本发明首次对亮氨酸脱氢酶底物通道内碱性氨基酸残基进行定点突变,改造了酶可能底物结合位点附近的结构及环境,获得了更加高效制备L‑2‑氨基丁酸的亮氨酸脱氢酶。本发明提供的底物耐受性提高的亮氨酸脱氢酶突变体亮氨酸脱氢酶突变体K72A能耐受4.5g/L 2‑酮丁酸且对于底物2‑酮丁酸的催化活力提高了15%。

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