公开(公告)号：CN103602624B

公开(公告)日：2015-09-30

申请号：CN201310342415.2

申请日：2013-08-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  杨套伟 ,  张显 ,  徐美娟 ,  满在伟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12P7/18 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明从B.amyloliqefaciens B10-127中克隆出参与2,3-丁二醇合成途径中辅酶循环再生的关键酶基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)和3-羟基-2-丁酮还原酶(acr)，并将该基因与穿梭表达质粒pMA5-HpaII连接，成功构建了携带基因gapdh和acr基因的穿梭表达质粒pMA5-HpaII-acr-HapII-gapdh，并转入解淀粉芽孢杆菌B10-127中，获得加强gapdh和acr基因表达的解淀粉芽孢杆菌pMA5-HpaII-acr-HapII-gapdh／B.amyloliquefaciens。原始菌株相比，重组菌2,3-丁二醇产量提高了14.7％，副产物如3-羟基-2-丁酮、乳酸和丁二酸的积累分别降低65.6％、43.8％和42.4％，且发酵周期有所缩短。通过补料流加发酵，2,3-丁二醇产量达到121.3g／L。

公开(公告)号：CN103243117B

公开(公告)日：2015-07-08

申请号：CN201310196207.6

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  司冠儒 ,  徐美娟

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/20 ,  C12R1/125

Abstract: 一种利用重组Bacillus subtilis克隆表达粘质沙雷氏菌脂肪酶的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得粘质沙雷氏菌中脂肪酶(lipA)的基因扩增，然后利用pMA-5质粒，首次实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明首次构建产粘质沙雷氏菌脂肪酶的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现经过培养基成分及培养条件的优化之后脂肪酶活为98.6U/mL，是出发菌8.57U/mL的12倍，脂肪酶的活力较出发菌株有了显著提高。本发明为微生物发酵法生产脂肪酶的工业化提供了积极的指导作用并且可用于食品工业领域中。

公开(公告)号：CN104531747A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410748914.6

申请日：2014-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  秦敬儒 ,  徐美娟 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 通过引入PHB代谢途径到Corynebacterium crenatum SYPA中，从而高产L-精氨酸，属于基因工程和生物工程领域。该发明酶切质粒pBHR68获得合成PHB的操纵子，与棒杆菌表达载体pDXW-10连接，并将其在C.crenatum SYPA中表达，为国内外首次通过引入PHB代谢途径在野生型钝齿棒杆菌中高产L-精氨酸。对构建的基因工程菌株进行酶活力测定及胞内辅酶水平研究证明C.crenatum SYPA/pDXW-10-phbCAB合成L-精氨酸的能力得到加强。最终在30℃，pH 7.0及600rpm条件下，C.crenatum SYPA/pDXW-10-phbCAB在5-L发酵罐发酵96h可产得43.21 g/L的L-精氨酸，为国内外首次通过引入PHB代谢途径到菌体内，调节胞内代谢网络，最终实现高产L-精氨酸的目的，为微生物工业化生产L-精氨酸提供了基础。

公开(公告)号：CN104480137A

公开(公告)日：2015-04-01

申请号：CN201410748908.0

申请日：2014-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  胡桂元 ,  郭静 ,  杨套伟 ,  徐美娟 ,  张显

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12N9/02 ,  C12P1/06 ,  C12R1/15 ,  C12R1/465

Abstract: 一株产酪氨酸酶重组钝齿棒杆菌的构建及其在黑色素生产中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过本实验室前期筛选得到的被命名为Streptomyces kathirae SC-1的菌株，利用分子技术克隆了以来自Streptomyces kathirae SC-1的酪氨酸酶基因(melC1C2)，构建重组表达载体pXMJ19-melC1C2，并将其电击转化到C.crenatum SYPA5-5，成功构建了基因工程菌C.crenatum SYPA5-5/pXMJ19-melC1C2。对构建的基因工程菌进行酶活测定，发现重组菌的酶活为61.5U/ml，而原始菌株C.crenatum SYPA5-5没有酶活。以L-酪氨酸为底物进行全细胞转化，黑色素产量为3.49g/L。本发明为首次将酪氨酸酶克隆到重组钝齿棒杆菌并用于黑色素的生产。

公开(公告)号：CN103266161B

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201310196282.2

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张温清 ,  邵明龙 ,  徐美娟 ,  张显 ,  李会

IPC: C12P33/02 ,  C12R1/125

Abstract: 重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis产ADD的高产发酵策略。通过单因子实验和正交实验，优化了重组菌Bacillus subtilis168/pMA5-ksdD的发酵培养基组分、培养条件及全细胞转化工艺。确定最优培养基中麦芽糖、大豆蛋白胨∶酵母膏(2∶1)、氯化铵、氯化钾、玉米浆、助溶剂甲基-β-环糊精和底物AD的浓度及pH；确定最佳接种量及培养条件。优化后ADD产量达1.80g/L，较优化前的0.65g/L大幅度提高177％。本发明通过对该重组菌发酵策略的研究，使其全细胞转化AD产ADD的能力获得了较大幅度的提高，为工业微生物一步发酵法高产ADD提供了一种可行的发酵策略。

公开(公告)号：CN104031934A

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201410249910.3

申请日：2014-06-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  许正宏 ,  张显 ,  杨套伟 ,  耿燕 ,  卢妍

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5是通过传统诱变育种手段获得的高产精氨酸菌株，该菌株具有独立知识产权。本专利以SYPA5-5基因组DNA为模板，扩增得到编码磷酸果糖激酶的基因pfk和丙酮酸激酶的基因pyk，将两者串联到表达载体pDXW-10上，电击转化到C.crenatum SYPA5-5中，构建得到基因工程菌SYPA5-5/pDXW-10-pfk-pyk。该工程菌中磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶同时得到加强表达，提高了EMP途径代谢强度，增加了葡萄糖消耗，工程菌在5L发酵罐发酵96h精氨酸产量为48.7g·L-1，比原始菌提高了27.5％。这是首次在钝齿棒杆菌中通过串联加强表达磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶提高精氨酸的发酵产量。

公开(公告)号：CN103014075B

公开(公告)日：2014-07-16

申请号：CN201210360637.2

申请日：2012-09-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  杨套伟 ,  张显 ,  徐美娟 ,  满在伟

IPC: C12P7/18 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了利用一株环境安全菌株Bacillus subtilis CTCC M2009200发酵生物柴油副产物粗甘油生产2，3-丁二醇的方法，属于生物工程中发酵技术领域。该方法主要包括种子培养和发酵培养。具体的说，将种子液按4％接种量接种于发酵培养基中，在37℃，空气流量为120m3/h·m3培养基，搅拌转速为350r/min条件下进行发酵培养，当发酵液中甘油浓度低于15g/L时，流加粗甘油补料液，使培养液中甘油的浓度维持在0-20g/L，当甘油消耗速率低于1g/l·h时，即刻停止发酵，发酵液即为含有2，3-丁二醇液体。本发明为生物柴油副产物粗甘油进行工业化深度开发提供了基础。

公开(公告)号：CN103320438A

公开(公告)日：2013-09-25

申请号：CN201310196281.8

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  张博慧 ,  徐美娟 ,  许正宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/48 ,  C12R1/19 ,  C12R1/15

Abstract: 一种钝齿棒杆菌溶氧诱导型启动子的筛选方法，属于蛋白质组学和基因工程领域。本发明首先通过2-DE技术结合质谱鉴定技术筛选钝齿棒杆菌不同溶氧条件下差异表达蛋白点，结合棒杆菌基因组信息将差异蛋白单位拷贝数高的2种蛋白作为研究对象。根据其编码基因克隆启动子序列命名为P-tkt和P-fum。分别替换穿梭载体pDXW-8上的tac启动子，并在其下游插入报告基因cat，分别转化大肠杆菌JM109和钝齿棒杆菌SYPA5-5，通过测定各重组菌在不同溶氧条件下CAT的活性，证明筛选到受高溶氧诱导的启动子P-tkt，首次获得来自钝齿棒杆菌高溶氧诱导型启动子，为钝齿棒杆菌在不同溶氧条件下表达外源基因提供了有效的工具。

公开(公告)号：CN102367468B

公开(公告)日：2013-07-24

申请号：CN201110289811.4

申请日：2011-09-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  杨娟 ,  徐美娟 ,  窦文芳

IPC: C12Q1/04 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种快速高效筛选L-精氨酸高产菌株的方法，属于工业微生物育种技术领域。传统的L-精氨酸高产菌株的筛选方法是通过筛选抗L-精氨酸结构类似物的菌株。本发明构建了一株大肠杆菌L-精氨酸缺陷型菌株作为L-精氨酸分泌的指示菌，TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种活细胞指示剂，它能被活细胞产生的还原氢还原成红色。将上述L-精氨酸缺陷型菌株作为L-精氨酸分泌的指示菌通过交互共养法以TTC为显色剂实现L-精氨酸生产菌株胞外L-精氨酸浓度高低的定性筛选，在平板上初筛出合成L-精氨酸能力高或分泌性能较优型菌株，该方法大大提高了菌种选育中的筛选效率而且节约了成本。

公开(公告)号：CN102021154A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN201010166997.X

申请日：2010-05-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  饶志明 ,  徐美娟 ,  张晓梅 ,  许泓瑜 ,  窦文芳

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: L-精氨酸是人体内所需半必需碱性氨基酸之一，具有多种独特的生理和药理作用。高产精氨酸突变菌株C.crenatum SYPA5-5以循环途径合成精氨酸，乙酰谷氨酸激酶(NAGK)是其合成途径中关键酶，受到产物精氨酸的反馈抑制。利用重叠PCR技术用编码天冬氨酸的GAT密码子取代了编码NAGK蛋白中287位的甘氨酸的GGA密码子，突变后获得高活性且受精氨酸的反馈抑制作用明显降低的NAGK。将argBSD基因通过pJCl-tac引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中，进一步提高关键酶的表达量。最终产酸水平由原来的28g/L提高至36.3g/L，L-精氨酸产量提高了29.7％。