公开(公告)号：CN118652869A

公开(公告)日：2024-09-17

申请号：CN202410363619.2

申请日：2021-07-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  王帅 ,  高思琪 ,  王瑶

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为特定Cas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确定位靶向DNA序列并产生切割，使所述靶序列发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑。所述各Cas9蛋白均具有数量相对少的氨基酸，可与相同的sgRNA形成复合体进行基因编辑。进一步地，所述Sa‑SchCas9蛋白和SchCas9蛋白识别的PAM序列非常简单，所述Sha2Cas9‑HF1蛋白、Sha2Cas9‑HF2蛋白、SpeCas9‑HF1蛋白、SpeCas9‑HF2蛋白和SpeCas9‑HF3蛋白特异性非常高且编辑效率很高。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN118165956A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410186305.X

申请日：2024-02-19

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  田雨闻 ,  毛惠琳

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体地涉及基于Tsp2Cas9蛋白和Tsp2Cas9‑HF蛋白的CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN113373130B

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202110606220.9

申请日：2021-05-31

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  王帅 ,  高思琪 ,  王瑶

IPC: C12N9/22 ,  C12N9/78 ,  C12N15/62 ,  C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种CRISPR/Cas12基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为特定Cas12蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确定位靶向DNA序列并产生切割，使所述靶序列发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑。所述特定Cas12J‑8蛋白具有数量相对少的氨基酸，并且所述特定Cas12J‑8蛋白、Cas12a蛋白和Cas12b蛋白均具有高的编辑效率，且三类蛋白识别的PAM序列均非常简单。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN116144629A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202211134139.6

申请日：2022-09-16

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  陶晨

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/62 ,  C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及基因编辑技术领域，具体地涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统涉及三种特定的Cas9蛋白——SauriCas9‑HF、Sha2Cas9‑HF和Sa‑SlugCas9‑HF及其与sgRNA形成的复合体，能够精确地定位靶向DNA序列并产生切割，使所述靶序列发生双链断裂损伤，具有高的特异性，能够降低细胞中或体外进行基因编辑的脱靶率，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110551761B

公开(公告)日：2022-11-18

申请号：CN201910731402.1

申请日：2019-08-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇 ,  王帅

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/864 ,  C12N15/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种CRISPR/Sa‑SepCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa‑SepCas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑；Sa‑SepCas9为融合蛋白，把SaCas9的PAM识别结构域（PAM interacting，PI）替换为SepCas9的PAM识别结构域（SepCas9‑PI）。Sa‑SepCas9蛋白小，为1055个氨基酸，识别的PAM序列简单，所述Sa‑SepCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110066852B

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN201910454917.1

申请日：2019-05-29

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种在哺乳动物细胞中检测CRISPR/Cas PAM序列的方法和系统。本发明方法的具体步骤如下：(1)构建包含PAM序列的质粒文库；(2)构建包含PAM序列的慢病毒文库；(3)构建包含PAM序列文库的细胞系；(4)流式分选去除荧光报告基因假阳性背景；(5)转染CRISPR/Cas至包含PAM序列文库的细胞系进行编辑；(6)流式分选出荧光报告基因阳性细胞，通过PCR构建二代测序文库；(7)生物信息学分析二代测序结果，找出能够产生基因编辑的PAM序列。本发明将快速筛选出在哺乳动物细胞中能产生基因编辑的CRISPR/Cas系统，并通过测序找出其需要的PAM序列。

公开(公告)号：CN112159801A

公开(公告)日：2021-01-01

申请号：CN202011003871.0

申请日：2020-09-22

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王帅 ,  高思琪

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/864

Abstract: 本申请涉及基因编辑技术领域，具体公开一种SlugCas9‑HF蛋白、含有该蛋白的重组载体、CRISPR/Cas9‑HF基因编辑系统及应用等。所述SlugCas9‑HF蛋白具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或具有与SEQ ID NO:1至少80％相同、且至少保留了R247A、N415A、T421A及R656A中的一种或两种以上突变的氨基酸序列，所述该蛋白的重组载体是将编码SlugCas9‑HF蛋白氨基酸的基因序列连接到基础载体上而得，CRISPR/Cas9‑HF基因编辑系统由SlugCas9‑HF蛋白和sgRNA组成，其可以高特异性编辑靶基因，编辑效率高，脱靶率在2.87%以内。

公开(公告)号：CN110551761A

公开(公告)日：2019-12-10

申请号：CN201910731402.1

申请日：2019-08-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇 ,  王帅

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/864 ,  C12N15/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种CRISPR/Sa-SepCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa-SepCas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑；Sa-SepCas9为融合蛋白，把SaCas9的PAM识别结构域（PAM interacting，PI）替换为SepCas9的PAM识别结构域（SepCas9-PI）。Sa-SepCas9蛋白小，为1055个氨基酸，识别的PAM序列简单，所述Sa-SepCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110551760A

公开(公告)日：2019-12-10

申请号：CN201910731390.2

申请日：2019-08-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇 ,  王帅

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/864 ,  C12N15/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种CRISPR/Sa-SeqCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa-SeqCas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑；Sa-SeqCas9为融合蛋白，把SaCas9的PAM识别结构域（PAM interacting，PI）替换为SeqCas9的PAM识别结构域（SeqCas9-PI）。Sa-SeqCas9蛋白小，为1053个氨基酸，识别的PAM序列简单，所述Sa-SeqCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN113652411B

公开(公告)日：2025-01-10

申请号：CN202110878452.X

申请日：2021-07-30

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  王帅 ,  高思琪 ,  王瑶

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为特定Cas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确定位靶向DNA序列并产生切割，使所述靶序列发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑。所述各特定Cas9蛋白识别的PAM序列种类多样，适应于不同场景下的基因编辑，拓宽了可靶向范围，并且所述特定Hsp1‑Hsp3Cas9‑Y446A蛋白和Hsp1‑Hsp3Cas9‑K390A‑Y446A蛋白具有较高的编辑活性和特异性。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。