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公开(公告)号：CN113999827A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111431087.4
申请日：2021-11-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Exiguobacterium sibiricum的NADH依赖型亮氨酸脱氢酶(LeuDH)作为亲本，基于定点突变技术对酶结构进行改造，通过半理性设计的方法获得了催化活性提高的突变体K77S/N270L/L52S和K77S/N270L/T143C。相对于亲本无法催化戊酮，该突变体酶在25℃孵育条件下，对戊酮体现催化活性。本发明所述突变体使得难以催化的戊酮底物展现催化活性，具有更好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN113717954A
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN202111022744.X
申请日：2021-09-01
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的甲酸脱氢酶突变体及其应用。本发明通过半理性设计和定点突变技术改造甲酸脱氢酶分子结构，最终获得了热稳定性提高的突变体酶K21P/K22R。突变体酶K21P/K22R在65℃孵育60min后，仍可保留高于80％的酶活，而亲本在65℃孵育30min后完全失活。突变体酶K21P/K22R的Tm为68.8℃，比亲本提高了4.5℃。同时，突变体酶K21P/K22R对底物甲酸钠的亲和力比亲本提升了近一倍，对甲酸钠的催化效率提升了40％；突变体酶K21P/K22R与亲本相比具有更广泛的碱性环境适应性和稳定性。热稳定性增强的突变体酶在催化工艺中有着更高的操作稳定性和重复利用批次，具有实际应用意义。
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公开(公告)号：CN111850065A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010746696.8
申请日：2020-07-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种辅助全细胞转化合成L-天冬酰胺的方法，本发明利用Ⅲ类多聚磷酸激酶2构建了单酶转化AMP再生ATP的系统，并将其应用于L-天冬酰胺的生物合成。将来自Deinococcus ficus的Ⅲ类PPK2在Escherichia coli Rosetta(DE3)中表达，酶活力为13.19U·mL-1。以E.coli Rosetta(DE3)/pET21a-DfiPPK2-Ⅲ和B.subtilis WB600/pMA5-LsaAS-A全细胞为催化剂催化L-Asp合成L-Asn并优化反应条件。结果显示两种重组菌湿细胞在最优反应条件下，并通过两次补料终浓度为60mmol·L-1的六偏磷酸钠，L-Asn的得率到达90.15％，比直接添加180mmol·L-1的六偏磷酸钠高80％。
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公开(公告)号：CN111621455A
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN202010350864.1
申请日：2020-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种表达天冬酰胺合成酶的重组枯草芽孢杆菌。本发明以表达载体为pMA5，枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)为宿主，异源表达了来源于唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)的天冬酰胺合成酶，LsaAS-A的比酶活达到6.585U/mg。以该酶或者可以表达该酶的全细胞作为催化剂，可以将L-天冬氨酸转化为L-天冬酰胺，相比于化学法及植物提取法生产过程副反应少，生产过程易控制，能够有效减少成本，污染小，具有很高的应用前景。
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公开(公告)号：CN116064451B
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202211116658.X
申请日：2022-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体及其在生产L‑2‑氨基丁酸中的应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的ω‑转氨酶突变体通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ω‑转氨酶的第153位缬氨酸突变为丙氨酸得到，突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明的ω‑转氨酶突变体催化活性提高，相对于野生型，突变体酶的酶活提高了578％。在300mM浓度的2‑羰基丁酸钠的条件下，反应12h后转化率可达到76％以上。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113717954B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202111022744.X
申请日：2021-09-01
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的甲酸脱氢酶突变体及其应用。本发明通过半理性设计和定点突变技术改造甲酸脱氢酶分子结构，最终获得了热稳定性提高的突变体酶K21P/K22R。突变体酶K21P/K22R在65℃孵育60min后，仍可保留高于80％的酶活，而亲本在65℃孵育30min后完全失活。突变体酶K21P/K22R的Tm为68.8℃，比亲本提高了4.5℃。同时，突变体酶K21P/K22R对底物甲酸钠的亲和力比亲本提升了近一倍，对甲酸钠的催化效率提升了40％；突变体酶K21P/K22R与亲本相比具有更广泛的碱性环境适应性和稳定性。热稳定性增强的突变体酶在催化工艺中有着更高的操作稳定性和重复利用批次，具有实际应用意义。
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公开(公告)号：CN111621455B
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202010350864.1
申请日：2020-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种表达天冬酰胺合成酶的重组枯草芽孢杆菌。本发明以表达载体为pMA5，枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)为宿主，异源表达了来源于唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)的天冬酰胺合成酶，LsaAS‑A的比酶活达到6.585U/mg。以该酶或者可以表达该酶的全细胞作为催化剂，可以将L‑天冬氨酸转化为L‑天冬酰胺，相比于化学法及植物提取法生产过程副反应少，生产过程易控制，能够有效减少成本，污染小，具有很高的应用前景。
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公开(公告)号：CN112680487B
公开(公告)日：2022-07-12
申请号：CN202110149981.6
申请日：2021-02-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种催化长侧链芳香族胺与2‑酮丁酸合成L‑2‑氨基丁酸的方法，本发明采用氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ω‑转氨酶作为催化剂催化长侧链芳香族胺与2‑酮丁酸合成L‑2‑氨基丁酸。本发明筛选得到的ω‑转氨酶，用于制备L‑2‑氨基丁酸，该ω‑转氨酶ppTA在利用无论是芳香族胺—苄胺，还是长侧链芳香族胺‑‑S‑苯基丁胺，在合成L‑2‑氨基丁酸方面有巨大潜力，在生物医药领域有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN105802988A
公开(公告)日：2016-07-27
申请号：CN201610261954.7
申请日：2016-04-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基因敲除载体及其构建方法和在三孢布拉霉中的应用，属于基因工程技术领域。本发明的基因敲除载体，由两个敲除载体片段组成，包含目的基因上、下游同源基因片段及筛选标记基因；其中一个敲除载体片段中含有目的基因上游同源片段和筛选标记基因的2/3的序列片段A，另一个敲除载体片段中含有目的基因下游同源片段和筛选标记基因的2/3的序列片段B，且A和B中有1/3是同源的。本发明敲除载体的构建方法简单方便，与其他方法相比，能够有效提高转化效率以便筛选转化子，并能够稳定遗传。此方法能够在三孢布拉霉中成功应用。
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公开(公告)号：CN116064445B
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202211116744.0
申请日：2022-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在生产L‑2‑氨基丁酸中的应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亮氨酸脱氢酶的第125位缬氨酸突变为蛋氨酸得到，突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体催化活性提高，相对于野生型，突变体酶的酶活提高了55％。在300mM浓度的2‑羰基丁酸钠的条件下，反应6h后转化率可达到94％以上。
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