一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法及其应用

    公开(公告)号:CN114814207A

    公开(公告)日:2022-07-29

    申请号:CN202210375088.X

    申请日:2022-04-11

    摘要: 本发明公开了一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法,本发明首先构建了四环素特异性分子信标核酸探针FAM‑Tc‑BHQ1,然后将FAM‑Tc‑BHQ1与穿膜肽KH9‑BP100于室温进行混合孵育,制备穿膜肽‑核酸适配体分子信标复合物,并且提供了一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法。本发明以四环素类抗生素产生菌金色链霉菌为模型,开展了穿膜肽介导的四环素特异性分子信标的活细胞载运及靶标检测研究。本发明采用穿膜肽非共价偶联四环素特异性分子信标,实现了分子信标的金色链霉菌活细胞载运及胞内四环素的单细胞水平活细胞荧光检测。

    耐受过氧化氢的枯草芽胞杆菌脂肪酶突变体及其制备方法

    公开(公告)号:CN109182299B

    公开(公告)日:2021-12-31

    申请号:CN201811278839.6

    申请日:2018-10-30

    摘要: 本发明提供了耐受过氧化氢的枯草芽胞杆菌脂肪酶突变体及其制备方法,脂肪酶突变体多肽链的氨基酸序列及其基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还包含了所含的脂肪酶突变基因的重组质粒及转化子。本发明利用ESI‑Q‑TOF‑MS分析脂肪酶经过氧化氢处理前后分子量的变化,确定被氧化氨基酸残基类型;进而利用丙氨酸扫描法确定被氧化氨基酸残基的位置;最后,利用定点突变技术和叠加突变技术,构建并筛选出对过氧化氢有良好耐受能力的脂肪酶突变体。利用本方法构建、筛选的脂肪酶突变体,阳性突变率为75%;其中LipA‑Trp42Ala/Met134Glu耐受过氧化氢的C50提高了10倍。

    热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-S109P/S271P及其制备方法

    公开(公告)号:CN108977419B

    公开(公告)日:2021-12-31

    申请号:CN201810897089.4

    申请日:2018-08-08

    摘要: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑S109P/S271P及其制备方法,所述突变体序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用软件,结合突变体自由能的变化值,构建突变体电子文库;从结构合理的突变体中,筛选出突变位点位于β‑转角的突变体,进行分析:组成β‑转角氨基酸残基z_B‑factor的平均值大于零;组成β‑转角氨基酸残基z_RMSF的平均值大于零;突变位点所的β‑转角柔性值大于1;与热稳定蛋白β‑转角氨基酸偏好性相同。满足上述两个条件的突变体组成微型突变文库。利用上述方法构建所述突变体,阳性突变体频率为33.3%,有效降低筛选工作量;获得突变体的失活半衰期较野生型OPE延长了3.6倍。

    制备固定化酶的方法及固定化酶和茶渣的用途

    公开(公告)号:CN112831490A

    公开(公告)日:2021-05-25

    申请号:CN202110156497.6

    申请日:2021-02-04

    IPC分类号: C12N11/12 C12N11/02

    摘要: 本发明公开了一种制备固定化酶的方法及固定化酶和茶渣的用途。该方法包括如下步骤:称取0.05~0.1g的茶渣,粉碎,过筛,收集粒径均一的茶渣;将处理后的茶渣用有机溶剂浸润,并超声波处理1~6h,离心后一次烘干,再用10~20g/L的山梨醇溶液浸润6~10h,二次烘干;向处理后的茶渣中加入浓度为0.5wt%~1.5wt%的交联剂150~300μL,一次孵育1~5h,洗涤、烘干,再加入30~100μL的酶液,二次孵育5~10h,洗涤、烘干,即得固定化酶。本发明的方法以茶渣作为固定化酶载体,充分利用茶渣资源,且制备的固定化酶重复利用率高。

    利用里氏木霉作为宿主表达重组蛋白的方法

    公开(公告)号:CN108070609B

    公开(公告)日:2020-12-18

    申请号:CN201711446635.4

    申请日:2017-12-27

    IPC分类号: C12N15/80 C12N15/67 C12R1/885

    摘要: 本发明公开了一种利用里氏木霉作为宿主表达重组蛋白的方法。本发明所提供的利用里氏木霉作为宿主表达重组蛋白的方法,包括如下步骤:将含有待表达的目的蛋白的编码基因的表达盒克隆到里氏木霉基因组中位于Protein ID为68606的基因和Protein ID为68608的基因之间的非编码区。本发明实验证明在cbh1基因缺失株中,将cbh1基因的表达骨架整合入位点ND1,并与野生菌株比较cbh1基因的表达水平,发现将重组基因插入该位点,可以获得与cbh1位点相当的表达水平。本发明进一步丰富完善了利用里氏木霉作为宿主高效表达重组蛋白的技术方案。

    吡咯喹啉醌在制备抗疲劳及缓解氧化应激损伤的产品中的应用

    公开(公告)号:CN111803503A

    公开(公告)日:2020-10-23

    申请号:CN202010794543.0

    申请日:2020-08-10

    摘要: 本发明涉及吡咯喹啉醌在制备抗疲劳及缓解氧化应激损伤的产品中的应用。经实验表明吡咯喹啉醌具有明显的抗疲劳、延长运动时间的作用,并不同程度地下调了氧化应激,减少了氧化应激引起的组织损伤,减轻了氧化应激引起的炎症反应,维持了机体的正常代谢;在长时间收缩肌管模型中,吡咯喹啉醌维持了正常的线粒体形态,稳定了线粒体功能,抑制了活性氧自由基(ROS,reactive oxygen species)的产生,进而减小了氧化应激引起的损伤,延缓了疲劳的发生,其效果非常优秀。