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公开(公告)号:CN109486738B
公开(公告)日:2020-08-04
申请号:CN201811507100.8
申请日:2018-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌全细胞转化生产宝丹酮的方法,属于基因工程和酶工程领域。本发明克隆了来源于Bipolaris oryzae的17β‑羟基类固醇脱氢酶,并实现在E.coli BL21(DE3)中过量共表达。此全细胞转化体系的建立,首次鉴定出Bipolaris oryzae来源的17β‑HSD具有17β‑羟基甾体脱氢酶功能,并在大肠杆菌表达体系中实现了Bipolaris oryzae来源的17β‑HSD的功能鉴定。经过24h全细胞转化,1g/L ADD可转化为872.9mg/L宝丹酮。本发明为微生物工业化生产宝丹酮提供了基础。
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公开(公告)号:CN108559735B
公开(公告)日:2020-07-07
申请号:CN201810443305.8
申请日:2018-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供一种亮氨酸脱氢酶突变体的构建及其应用,属于基因工程领域。本发明提供了SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6及SEQ ID NO.8三个亮氨酸脱氢酶突变体,以及上述突变体或产生突变体的基因工程菌在氨化还原α‑酮酸制备光学纯手性L‑α‑氨基酸中的应用。本发明在于:所述亮氨酸脱氢酶突变体或含有突变体基因工程菌氨化还原制备L‑α‑氨基酸具有高催化活性及稳定性,能够合成高光学纯度L‑α‑氨基酸(ee>99%),如突变体酶催化L‑苯甘氨酸的转化速率提高了2.62倍,为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号:CN111206011A
公开(公告)日:2020-05-29
申请号:CN202010147933.9
申请日:2020-03-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组谷氨酸棒杆菌及其在生产L-谷氨酸中的应用,属于生物技术领域。本发明提供了一种可高产L-谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum DL01/pDXW-10-ppc,将此重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum DL01/pDXW-10-ppc接种至5-L发酵罐中发酵48h,即可使发酵液中L-谷氨酸的产量高达136.09±5.53g/L、糖酸转化率高达58.9%,分别较野生型谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)G01提高了45.5%和13.7%。
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公开(公告)号:CN111172090A
公开(公告)日:2020-05-19
申请号:CN202010095689.6
申请日:2020-02-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用离子转运蛋白促进钝齿棒杆菌合成L-精氨酸的方法,具体公开了一种通过过表达单价阳离子/H+逆转运蛋白Mrp1A以及阳离子转运ATP酶CTAP1提高L-精氨酸产量的方法,属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对基因mrp1和ctap1的敲除和过表达,通过对胞内[Na+]和[K+]的测定,明确离子转运蛋白在离子浓度、pH稳态和渗透压方面的调节作用。采用5L发酵罐分批发酵策略,优化发酵条件,最终重组钝齿棒杆菌5-5(mrp1ctap1)发酵至96h,重组菌的L-精氨酸产量达到65.3g/L,产率为0.395g/g,比钝齿棒杆菌SYPA5-5提高了39.1%。
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公开(公告)号:CN110628793A
公开(公告)日:2019-12-31
申请号:CN201910891844.2
申请日:2019-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用生物传感器筛选精氨酸高产菌株的方法,属于生物技术领域。本发明提供了一种可用于筛选精氨酸高产菌株的生物传感器,此生物传感器含有编码阻遏蛋白的基因argR、编码启动子的基因PargC以及标记基因sacB,使用此生物传感器筛选精氨酸高产菌株具有操作简单、检测周期短、检测效率高的优势。
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公开(公告)号:CN110607319A
公开(公告)日:2019-12-24
申请号:CN201911040157.6
申请日:2019-10-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于枯草芽孢杆菌分泌表达蛋白的表达载体及应用,属于基因工程和生物技术领域。该分泌载体是将编码信号肽SPphoD的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1)和编码分子伴侣PrsA的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.3)分别连接到pMA5-P43上构建分泌质粒pMA5-SPP。以pMA5-SPP为载体,在枯草芽孢杆菌中表达L-天冬酰胺酶,其胞外分泌量占总表达量的38%,胞外分泌量是常见信号肽SPpel介导下分泌量的2.95倍。
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公开(公告)号:CN110438097A
公开(公告)日:2019-11-12
申请号:CN201910750086.2
申请日:2019-08-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体,具体公开了一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体及其在4-羟基异亮氨酸生产中的应用,属于基因工程技术领域。本发明提出的提高热稳定性的方法可用于其他羟化酶的改造,为生产其他高附加值羟化氨基酸提供了理论指导。利用本发明的的枯草芽孢杆菌工程菌生产得到的L-异亮氨酸羟化酶的比酶活可达2.4±0.08U/mg,全细胞重复5批次,连续转化45h,可以得到856.91mM(126.1g/L)的4-HIL,且5批次后,L-异亮氨酸羟化酶的转化能力仍为第一次转化的84.1%。
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公开(公告)号:CN106282080B
公开(公告)日:2019-09-03
申请号:CN201610654331.6
申请日:2016-08-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新金色分枝杆菌来源的甾酮C27‑单加氧酶及其应用,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过基因敲除及加强表达的方法,在新金色分枝杆菌中筛选到甾醇边链降解过程中关键酶SMO的三个同工酶。将其分别在高产雄甾二烯二酮(ADD)的新金色分枝杆菌中加强表达,ADD产量得到明显提高,其中SMO2的效果最明显。通过过量表达SMO2,ADD最终产量从5.2g/L提高到7.3g/L。本发明为微生物发酵法提高ADD产量的工业化提供了有益的指导。
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公开(公告)号:CN109943548A
公开(公告)日:2019-06-28
申请号:CN201910265104.8
申请日:2019-04-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法,具体公开了一种通过整合突变改造双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD,修饰pII信号转导蛋白GlnK尿苷酰化,提高L-精氨酸产量的方法,属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD的整合突变改造,在此基础上过量表达pII信号转导蛋白GlnK,增强GlnK的尿苷酰化。采用5-L发酵罐分批发酵策略,优化发酵条件,最终重组钝齿棒杆菌Cc-HDAA/pXMJ19-glnK发酵至96h,重组菌的L-精氨酸产量达到52.2g/L,生产强度达到0.544g/L·h,实现了L-精氨酸的高产。
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公开(公告)号:CN106191152B
公开(公告)日:2019-04-16
申请号:CN201610574794.1
申请日:2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明通过增强氨同化作用促进钝齿棒杆菌L‑精氨酸合成。主要是将氨同化途径关键酶钝齿棒杆菌来源谷氨酰胺合酶编码基因glnA和谷氨酸脱氢酶编码基因gdh,以及大肠杆菌来源的天冬氨酸酶编码基因aspA在钝齿棒杆菌SDNN403中过量共表达,可以有效提高钝齿棒杆菌SDNN403L‑精氨酸产量。
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