一种利用重组大肠杆菌全细胞转化生产宝丹酮的方法

    公开(公告)号:CN109486738B

    公开(公告)日:2020-08-04

    申请号:CN201811507100.8

    申请日:2018-12-10

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌全细胞转化生产宝丹酮的方法,属于基因工程和酶工程领域。本发明克隆了来源于Bipolaris oryzae的17β‑羟基类固醇脱氢酶,并实现在E.coli BL21(DE3)中过量共表达。此全细胞转化体系的建立,首次鉴定出Bipolaris oryzae来源的17β‑HSD具有17β‑羟基甾体脱氢酶功能,并在大肠杆菌表达体系中实现了Bipolaris oryzae来源的17β‑HSD的功能鉴定。经过24h全细胞转化,1g/L ADD可转化为872.9mg/L宝丹酮。本发明为微生物工业化生产宝丹酮提供了基础。

    一种亮氨酸脱氢酶突变体的构建及其应用

    公开(公告)号:CN108559735B

    公开(公告)日:2020-07-07

    申请号:CN201810443305.8

    申请日:2018-05-10

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明提供一种亮氨酸脱氢酶突变体的构建及其应用,属于基因工程领域。本发明提供了SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6及SEQ ID NO.8三个亮氨酸脱氢酶突变体,以及上述突变体或产生突变体的基因工程菌在氨化还原α‑酮酸制备光学纯手性L‑α‑氨基酸中的应用。本发明在于:所述亮氨酸脱氢酶突变体或含有突变体基因工程菌氨化还原制备L‑α‑氨基酸具有高催化活性及稳定性,能够合成高光学纯度L‑α‑氨基酸(ee>99%),如突变体酶催化L‑苯甘氨酸的转化速率提高了2.62倍,为其工业化生产提供了一种实际有效策略。

    一种用离子转运蛋白促进钝齿棒杆菌合成L-精氨酸的方法

    公开(公告)号:CN111172090A

    公开(公告)日:2020-05-19

    申请号:CN202010095689.6

    申请日:2020-02-17

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种用离子转运蛋白促进钝齿棒杆菌合成L-精氨酸的方法,具体公开了一种通过过表达单价阳离子/H+逆转运蛋白Mrp1A以及阳离子转运ATP酶CTAP1提高L-精氨酸产量的方法,属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对基因mrp1和ctap1的敲除和过表达,通过对胞内[Na+]和[K+]的测定,明确离子转运蛋白在离子浓度、pH稳态和渗透压方面的调节作用。采用5L发酵罐分批发酵策略,优化发酵条件,最终重组钝齿棒杆菌5-5(mrp1ctap1)发酵至96h,重组菌的L-精氨酸产量达到65.3g/L,产率为0.395g/g,比钝齿棒杆菌SYPA5-5提高了39.1%。

    一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体

    公开(公告)号:CN110438097A

    公开(公告)日:2019-11-12

    申请号:CN201910750086.2

    申请日:2019-08-14

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体,具体公开了一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体及其在4-羟基异亮氨酸生产中的应用,属于基因工程技术领域。本发明提出的提高热稳定性的方法可用于其他羟化酶的改造,为生产其他高附加值羟化氨基酸提供了理论指导。利用本发明的的枯草芽孢杆菌工程菌生产得到的L-异亮氨酸羟化酶的比酶活可达2.4±0.08U/mg,全细胞重复5批次,连续转化45h,可以得到856.91mM(126.1g/L)的4-HIL,且5批次后,L-异亮氨酸羟化酶的转化能力仍为第一次转化的84.1%。

    一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法

    公开(公告)号:CN109943548A

    公开(公告)日:2019-06-28

    申请号:CN201910265104.8

    申请日:2019-04-03

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法,具体公开了一种通过整合突变改造双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD,修饰pII信号转导蛋白GlnK尿苷酰化,提高L-精氨酸产量的方法,属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD的整合突变改造,在此基础上过量表达pII信号转导蛋白GlnK,增强GlnK的尿苷酰化。采用5-L发酵罐分批发酵策略,优化发酵条件,最终重组钝齿棒杆菌Cc-HDAA/pXMJ19-glnK发酵至96h,重组菌的L-精氨酸产量达到52.2g/L,生产强度达到0.544g/L·h,实现了L-精氨酸的高产。

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